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大肠杆菌(Escherichia coli)作为一种重要的工业微生物,其底物利用范围广(如秸秆等纤维素、半纤维素水杆菌的乙醇产率和耐乙醇能力是乙醇生产的主要影响因素。本研究从不同来源的E.coli解产物中几乎的所有糖类),遗传背景清楚,是构建产乙醇菌株的理想候选菌。然而,大肠中筛选具有较强耐乙醇能力的E.coli MG1655菌株,并通过定向筛选方法获得高耐乙醇(60g/1)的突变株(MG1655E)。将携带运动发酵单胞菌((Zymomonasmobilis)强启动子、丙酮酸脱毅酶(PDC)和乙醇脱氢酶(ADHB)基因的质粒转化到MG1655E中,获得产乙醇重组菌MG1655E-pZY507bc。其菌株生长速率显著高于不含质粒的E.coli;10[%]葡萄糖的发酵实验显示MG1655E-pZY507bc乙醇产量提高了36倍,外源PDC和ADHB基因的表达导致细胞的糖代谢中心代谢产物—丙酮酸流向乙醉的生产。进一步利用大肠杆菌Red重组系统,敲除MG1655E中编码丙酮酸甲酸裂解酶基因(pf 1B)和乳酸脱氢酶基因(1dhA)。所构建的产乙醇代谢工程菌(MPL-pZY507bc),葡萄糖,木糖发酵试验显示其乙醇产量分别比未敲除pf1B及1dhA工程菌(MG1655E-pZY5076c)提高了34.8[%]和19.9[%],并且在发酵产物中没有检测到甲酸和乳酸的累积,在60g/1乙醇浓度仍能正常生长。