GM-CSF上调肿瘤相关中性粒细胞表面PD-L1的表达从而抑制T细胞免疫

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目的 :分析胃癌患者外周血中及不同类型胃组织(胃癌、癌旁及正常胃组织)中的中性粒细胞分布情况;胃癌中肿瘤相关中性粒细胞(TAN)的表型分析;TAN对T细胞功能的抑制作用研究;TAN抑制T细胞免疫的机制研究。方法 :1.收集胃癌患者外周血及不同类型胃组织标本进行流式染色,以健康成人外周血做对照,分析不同标本中中性粒细胞占白细胞的比例;2.收集胃癌患者外周血及不同类型胃组织标本,运用流式细胞术分析中性粒细胞表面CXCR1、CXCR2、CD54、CD62L及PD-L1的表达情况;3.分选胃癌患者外周血、胃癌组织及正常胃组织中的中性粒细胞,加入或不加入anti-PD-L1抗体,与CD3+T细胞共培养,检测T细胞的增殖及IFNγ的产生;4.用胃癌组织培养上清或重组人GM-CSF刺激健康成人外周血中性粒细胞以诱导条件性中性粒细胞,以正常胃组织培养上清或1640做对照,检测条件性中性粒细胞表面PD-L1的表达;将条件性中性粒细胞与CD3+T细胞共培养,加入或不加入anti-PD-L1抗体,检测T细胞的增殖及IFNγ的产生。结果 :1.胃癌患者外周血中性粒细胞比例明显高于健康成人;胃癌组织中的TAN的频率显著高于癌旁组织和正常胃组织;2.TAN的表型为CXCR1lowCXCR2lowCD62LlowCD54high,且高表达免疫抑制性分子PD-L1;3.TAN可以抑制T细胞功能且此抑制作用与PD-L1相关;4.胃癌组织培养上清及GM-CSF可刺激中性粒细胞上调PD-L1的表达;条件性中性粒细胞可以抑制T细胞功能且此抑制作用与PD-L1相关。结论 :1.中性粒细胞在胃癌患者外周血中比例增高,在胃癌组织中浸润增加;2.TAN是一群处于激活状态的中性粒细胞;3.TAN通过PD-L1抑制T细胞功能;4.GM-CSF上调中性粒细胞表面PD-L1的表达从而发挥抑制T细胞免疫的作用。
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