论文部分内容阅读
目的:探讨信号蛋白PKC-ζ在间质细胞衍生因子1(Stromal-derived factor 1,SDF-1)趋化人表皮干细胞定向迁移中的作用及其机制。
方法:Ⅳ型胶原快速分选,无血清培养基(DK-SFM) 培养表皮干细胞,免疫组织化学染色观察表皮干细胞标志物β1整合素(β1 integrin)和角蛋白19(K19) 的表达;用transwell趋化小室观察SDF-1对Chelerythrine chloride(钙和DAG依赖性和非依赖性PKC亚型抑制剂)、Staurosporine(钙和DAG依赖性PKC亚型抑制剂)和PS-ζ(PKC-ζ特异性抑制剂)处理后人表皮干细胞的趋化作用;Western Blot方法检测SDF-1诱导后不同时段的人表皮干细胞PKC-ζ的磷酸化水平变化;采用Phalloidin-Rhodamine显示细胞骨架,激光共聚焦显微镜观察PKC-ζ抑制剂PS-ζ对人表皮干细胞极化的影响。
结果:分离培养出人表皮干细胞,免疫组织化学染色显示,细胞胞质中β1整合素及角蛋白Kl 9 均呈阳性表达。Chelerythrine chloride和PS-ζ能够抑制SDF-1趋化的表皮干细胞运动,而Staurosporine不能抑制SDF-1趋化的表皮干细胞运动;SDF-1能够引起表皮干细胞PKC-ζ的磷酸化水平增加;PS-ζ能够抑制SDF-1诱导的人表皮干细胞极化作用。
结论:信号蛋白PKC-ζ在SDF-1趋化的人表皮干细胞定向迁移中发挥重要作用。