林麝IL-1β基因的克隆、表达及其功能分析

来源 :第二届中国西部动物学学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shanxiaoqqqq
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  林麝(Moschus berezovskii)是独居的反刍动物,其分泌的麝香是重要的香料和药物。近几十年来的大量捕杀和栖息地破坏,导致其种群数量锐减,现已成为我国一级珍稀保护动物。目前人工圈养林麝存在很多制约因素,其中以细菌感染而引发的各种传染性疾病为主,其致死率占麝总死亡率的60%以上,因此对这些疾病的防御和治疗成为当前麝类保护工作的首要任务。白介素1-β(interleukin-1β,IL-1β)是IL-1家族的重要成员,主要由活化的巨噬细胞和血液单核细胞产生,它在病菌引起的身体防御、炎症反应、免疫应答和组织损害等免疫过程中具有重要作用。基于IL-1β在免疫反应中的重要地位,我们对林麝IL-1β基因进行了克隆、表达和功能分析。本研究从林麝外周血单核细胞中提取RNA,反转录得到cDNA,根据特异性引物扩增林麝IL-1β基因开放阅读框(ORF)序列。结果表明,克隆得到序列确为林麝IL-1β基因编码区序列,全长801bp,编码266个氨基酸。因IL-1β蛋白成熟肽才具备高效生物学活性,因此PCR扩增林麝IL-1β基因成熟肽编码序列并将其插入原核表达载体pET-32a(+)中,转化大肠杆菌后诱导表达,在优化表达条件后得到可溶性的林麝IL-1β重组蛋白,将该蛋白进行纯化后,MTT法检测出纯化后林麝IL-1β蛋白能明显促进淋巴细胞增殖,表明该蛋白具有生物学活性,为进一步研究IL-1β对林麝疾病防治提供实验依据,也为制备林麝抗细菌感染性疾病新型药物提供一个良好的思路。
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