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目的：通过与现有NK细胞和CIK细胞体外扩增方案比较,建立一种大规模高效扩增外周血来源CD56+淋巴细胞体外扩增方案.方法：分离5例临床随机选取的晚期乳腺癌患者外周血单个核细胞,分别采用CD56+淋巴细胞体外扩增方案(1号方案),NK细胞体外扩增方案(2号方案)及CIK细胞体外扩增方案(3号方案)培养.在培养第0,5,10,15,20天通过流式细胞术检测细胞免疫表型,体外培养21天后检测对K562细胞系的杀伤活性.观察2号培养方案扩增产物纯化的CD3-CD56+ NK细胞及CD3+CD56+CIK细胞对不同乳腺癌细胞系(K562,MCF-7,MDA-MB435细胞系)的杀伤活性比较,及MHC,KIR和NKG2D对两组细胞亚群杀伤活性的影响.结果：在培养第20天,1号培养方案的CD56+淋巴细胞占总细胞数的百分比达(73.64±16.30)％,且细胞数绝对值由(3.73±2.17)×106扩增到(6.64±3.56) ×108,扩增倍数294.52±337.55倍.与2,3号方案相比,1号方案体外扩增CD56+淋巴细胞数明显高于2,3号方案,且均是它们的3倍.1号培养方案培养外周血21天后对K562细胞系的杀伤活性明显高于2,3号方案.磁珠分选出的纯化CD3-CD56+ NK细胞在效靶比40∶1条件下对K562细胞系的杀伤力明显高于对MDA-MB435细胞系和MCF-7细胞系的杀伤(P =0.019,0.022),而纯化后的CD3+ CD56+的NK-T细胞对MDA-MB435细胞系的杀伤力明显高于对K562细胞系和MCF-7细胞系的杀伤力(P =0.001,0.005).在效靶比40∶1条件下,纯化后的NK细胞对K562细胞系的杀伤力明显高于NK-T细胞对其的杀伤(P=0.012).NK细胞对K562细胞系的杀伤力明显高于封闭KIR的NK细胞和封闭NKG2D的NK细胞对K562细胞系的杀伤力(P =0.014,0.037),而封闭NKG2D的NK-T细胞失去MHC限制性的杀伤,但KIR封闭抗体对其影响不大.结论：1号培养方案可高效高质量的同时扩增两种杀伤机制不同的NK细胞与CIK细胞(即CD56+淋巴细胞).经磁珠分选出的纯化NK细胞无MHC限制,对K562细胞系杀伤敏感,且KIR和NKG2D在NK细胞的杀伤中起重要作用；NK-T细胞杀伤以T细胞杀伤为主,兼有NK细胞杀伤特性.NKG2D在NK-T细胞的MHC限制性杀伤中起重要作用,而KIR对其影响不大.