【摘 要】
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为对柔嫩艾美尔球虫子孢子阶段的基因克隆和分析研究.利用invitrogen的CloneMiner Ⅱ cDNAL-ibrary Construction Kit构建了柔嫩艾美尔球虫子孢子阶段的全长cDNA文库.用Invit
【机 构】
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中国农业大学动物医学院,国家动物原虫实验室,北京,100193
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会
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为对柔嫩艾美尔球虫子孢子阶段的基因克隆和分析研究.利用invitrogen的CloneMiner Ⅱ cDNAL-ibrary Construction Kit构建了柔嫩艾美尔球虫子孢子阶段的全长cDNA文库.用Invitrogen Trizol Reagent提出总RNA,用Fasttrack2.0试剂盒分离mRNA,以mRNA为模板进行cDNA双链的合成并对加重组接头和分级分离纯化,将分级分离纯化的cDNA与pDONR222载体进行重组反应,并将重组产物用电转化法转入DH10B感受态细胞内得到原始文库,扩增后保存于:80℃冰箱内.随机抽提质粒进行测序,在NCBI中利用BLAST进行比对,并利用与NCBI中ORF Finder软件对测序结果进行ORF的预测.经测定,构建的cDNA文库库容量约为0.5～1×107,平均平均插入片段大于1.0 kb,重组率大于85％,全长比例大于50％.随机选取20个克隆测序中含有EtMICl、EtSERPIN1及其他与弓形虫高度类似的基因.本研究成功构建了柔嫩艾美尔球虫高质量的子孢子全长cDNA文库,从而为研究相关的功能基因奠定了基础.
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