重组活性羧肽酶B的克隆表达及复性研究

来源 :2004年全国生化与生物技术药物学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:pengpengice
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羧肽酶B(carboxypeptidaseB,CPB,EC3.4.17.2)是一种含锌的胰外肽酶,特异的水解肽链C端的碱性氨基酸:精氨酸,赖氨酸或鸟氨酸,CPB含307个氨基酸,分子质量35ku。 本文研究,天然存在的CPB是由前羧肽酶原B(preprocarboxypeptidaseB)产生的,其N-末端包含108个氨基酸(其中13个氨基酸为信号肽序列,95个氨基酸组成活性肽部分)的片段与C端的CPB相连,前羧肽酶原B在转运到内质网的过程中,信号肽被切掉,得到不具酶活性羧肽酶原B(procarboxypeptiedaseB,pCPB)从细胞中分泌出来,然后通过胰蛋白酶将其酶解为具酶活性的CPB和活性肽部分.由于CPB是一种蛋白水解酶,在体内以酶原形式分泌,直接表达CPB可能会对表达系统产生影响,故考虑用酶原的形式表达,表达出的pCPB再进行胰蛋白酶酶切获得具酶活性的CPB。
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