【摘 要】
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本研究旨在通过同源重组的方法建立一套有效的适用于布拉氏酵母菌的基因敲除体系.以URA3为目的基因进行敲除,通过两次PCR的方法将遗传标记扩增,然后进行酵母菌的转染将PCR产
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会
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本研究旨在通过同源重组的方法建立一套有效的适用于布拉氏酵母菌的基因敲除体系.以URA3为目的基因进行敲除,通过两次PCR的方法将遗传标记扩增,然后进行酵母菌的转染将PCR产物导入到酵母菌基因组中,同时利用带有Cre的质粒实现筛选标记的重复利用,通过遗传标记的筛选得到突变株.最后将目的基因重新导入到突变株中,可以使突变株在营养缺陷型的培养基中生长.布拉氏酵母菌基因敲除系统的成功建立,为从分子水平上研究益生菌的作用机理、基因调控通路和机理提供了强有力的手段,以及进行功能基因的敲除、插入及染色体基因的替换,进而可以阻断微生物细胞的代谢旁路,减弱毒/副作用,强化目标产物的产量或质量奠定坚实基础.
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