毕赤酵母中高效表面展示植酸酶及其应用

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目前大部分的真菌表达的植酸酶在低pH条件下具有较低的活力,且蛋白纯化的成本高也制约着植酸酶的广泛应用。植酸酶在毕赤酵母表面展示不仅可以避免蛋白纯化所需的繁琐的步骤,还可用于全细胞生物催化。将来源于柠檬酸杆菌(Citrobacter amalonaticus CGMCC 1696)的植酸酶蛋白Phy与毕赤酵母内源的糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白Gcw61p进行融合表达,使植酸酶Phy展示在毕赤酵母GS115细胞表面。荧光显微镜和流式细胞仪检测显示,植酸酶Phy已成功展示在毕赤酵母GS115细胞表面。毕赤酵母表面展示的植酸酶在1%(v/v)甲醇诱导96h后,酶活力达到6413.5U/g,高于在酿酒酵母和毕赤酵母表面展示的植酸酶。而与分泌型植酸酶的最适pH 5.0相比,展示在毕赤酵母细胞表面的最适pH值为3.0,此外,植酸酶Phy锚定在酵母细胞表面相比对应的分泌型植酸酶具有较高的pH稳定性。在模拟体外消化实验中,与分泌型植酸酶相比,附着于酵母细胞表面的植酸酶具有更高效的催化能力。植酸酶Phy成功在毕赤酵母GS115表面展示,避免了蛋白纯化,提高了其pH稳定性,提高了其在动物消化饲料中的应用,同时,酵母细胞本身也能作为饲料,提高了总体的营养价值。
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