【摘 要】
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【背景与目的】近数十年来,男性不育越来越为人们所关注,虽然男性不育的诊断、药物治疗及社会管理等方面在不断进步,尤其是辅助生殖技术的成熟推广,许多患者圆了自己的生育梦。但前提是这些不育患者必须能够产生具有一定数量并且有功能的生殖细胞,而对于那些不能产生具有正常功能的生殖细胞或健全的单倍体精子的不育患者,干细胞移植治疗是其理想选择。我们的前期研究表明,HUMSCs在体外能够向生殖细胞诱导分化,移植到不
【机 构】
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2016年第六届全国药物毒理学年会论文集
【出 处】
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2016年第六届全国药物毒理学年会论文集
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【背景与目的】近数十年来,男性不育越来越为人们所关注,虽然男性不育的诊断、药物治疗及社会管理等方面在不断进步,尤其是辅助生殖技术的成熟推广,许多患者圆了自己的生育梦。但前提是这些不育患者必须能够产生具有一定数量并且有功能的生殖细胞,而对于那些不能产生具有正常功能的生殖细胞或健全的单倍体精子的不育患者,干细胞移植治疗是其理想选择。我们的前期研究表明,HUMSCs在体外能够向生殖细胞诱导分化,移植到不育小鼠体内后能够分化表达生殖细胞标记,能够促进不育小鼠睾丸组织修复。本研究旨在前期研究基础上,进一步探讨人脐带间充质干细胞移植对不育小鼠睾丸生殖细胞、支持细胞及间质细胞的作用。【材料与方法】（1）采用组织块贴壁法分离、培养、扩增HUMSCs;（2）采用腹腔内单次注射白消安的方法构建不育小鼠模型;（3）通过显微注射法将HUMSCs移植到不育小鼠睾丸曲细精管内,移植后常规饲养;（4）分别于移植后第1周、2周、1月、2月解剖收取小鼠睾丸;（5）采用组织病理切片和免疫荧光显微镜下观察的方法来观察HuMSCs在曲细精管内的存活、分布及分化情况,qRT-PCR检测生殖细胞、SCs、LCs特异性标记在睾丸组织中的表达情况。【结果】（1）采用组织块贴壁法,用无血清培养体系体外培养、扩增HUMSCs能正常生长2个月以上;（2）腹腔内单次注射白消安4周后,小鼠睾丸体积明显缩小,包膜松弛,管腔变小、质脆,镜下见生精上皮损伤,生精细胞脱落,绝大部分管腔呈"空泡样"改变,不育小鼠模型构建成功;（3）通过显微注射法成功将细胞移植到小鼠睾丸曲细精管,移植1周后HuMSCs主要存在于睾丸曲细精管的官腔内,且有逐渐向基底膜移行的趋势,1月后即可观察到细胞分布在生精上皮近基底膜处,2月时定植于基底膜;（4）不育小鼠移植HUMSCs后,大体观下睾丸体积较阴性对照增大（p＜0.05）,镜下见生殖细胞增生恢复加快;（5）qRT-PCR结果显示,HUMSCs移植后1、2月,HUMSCs移植组生殖细胞标记Ddx4表达水平明显升高,与阴性对照组有显著性差异（p＜0.05）;移植后不成熟SCs标记Amh的表达水平明显升高,与阴性对照组有显著性差异（p＜0.05）;移植后1、2周、1月,成熟SCs标记Ar的表达水平明显升高,与阴性对照组有显著性差异（p＜0.05）,2月时无明显差异（p＞0.05）;fetal LCs标记Lhcgr在移植后1、2周时较阴性对照组明显升高（p＜0.05）,1、2月时则降低（p＜0.05）;adult LCs标记Hsd-3b1在移植后1、2周时较阴性对照组明显升高（p＜0.05）,1月时降低（p＜0.05）,2月时无明显差异（p＞0.05）。【结论】（1）采用无血清培养体系,运用组织块贴壁法,HuMSCs体外扩增培养能正常生长至少2个月;（2）HUMSCs移植不育小鼠曲细精管后能够存活并发生迁移,1月后分布在生精上皮近基底膜处,2月时定植于基底膜;（3）HUMSCs对不育小鼠生殖细胞生长有促进作用,并持续增强;（4）HUMSCs对支持细胞的生长有促进作用,但2周后逐渐减弱;（5）HUMSCs对间质细胞生长初期有促进作用,但两周后转为抑制。
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