纳米介孔材料固定化酶用于药物筛选的研究

来源 :第八届全国微全分析系统学术会议、第三届全国微纳尺度生物分离分析学术会议暨第五届国际微化学与微系统学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ch21st
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  具有高比表面积、大孔容、均一可调孔径和可修饰丰富有机基团的介孔材料是酶固定化的优良载体.固定化酶不仅保持原有的催化特性,还具有易于分离、稳定性高和可重复高效使用等特点,在生物、环境领域具有广阔的应用前景.本论文通过调节模板剂和扩孔剂的比例,改变修饰方法以及前驱体,合成了12种不同孔径的羧基化介孔材料;利用12种材料分别在不同pH下固定化α-葡萄糖苷酶,考察不同条件下固定化酶的固定量和酶活;综合酶固定效率和酶活,选择最优的pH 条件和材料,然后制备固定化酶色谱柱;将酶色谱柱连接HPLC,建立筛选模型,从20种中药水提物中在线筛选α-葡萄糖苷酶抑制剂.采用水热合成法,以四甲氧基硅烷(TMOS)为前驱体,通过调节模板剂三嵌段化合物聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯(P123)和扩孔剂1,3,5-三甲基苯(TMB)的比例(4/4、4/3、4/2),合成三种孔径分别为28.6nm、28.6nm和16.8nm的介孔材料,之后采用后修饰的方法,以2-氰基丙基三乙氧基硅烷(CETES)为偶联剂,分别对三种材料进行羧基化;采用一步合成法,在材料合成的过程中添加CETES,合成三种不同孔径的羧基化材料,孔径分布很宽,分别为10~30nm、28.6(10~50)nm和12.6(10~20)nm;以1,2-双-三乙氧基硅基乙烷(BETSE)为前驱体,调节P123与TMB比例4/4、4/3、4/2,直接添加CETES,合成三种孔径分别为15.09nm、13.38nm 和10.66nm的羧基修饰的介孔有机氧化硅材料(PMOs).在pH3.5、pH4.0和pH4.5的条件下,用上述12种材料固定α-葡萄糖苷酶,结果表明在pH为4.5,冰浴孵育固定6~7h 时,P123/TMB=4/3(即孔径为13.38 nm)的-COOH-PMOs材料具有最大的酶固定量和酶活.将P123/TMB=4/3的-COOH-PMOs材料固定化的α-葡萄糖苷酶装入规格为4.6-50mm的空色谱柱,制备α-葡萄糖苷酶抑制剂筛选模型;连接HPLC,用α-葡萄糖苷酶典型的抑制剂阿卡波糖验证模型的有效性;利用该模型,从五倍子、虎杖、连翘等20 种中药水提物中在线筛选α-葡萄糖苷酶的抑制剂.结果表明,该模型适合对α-葡萄糖苷酶抑制剂进行筛选,具有可靠、稳定、可重复、快速等优点.一共筛选出对α-葡萄糖苷酶具有显著抑制作用的中药水提物有五倍子、鸡血藤、虎杖、桑叶、白芍、白芷、皂角刺7 种;有弱抑制作用有茜草;既有抑制作用又有激活作用的有连翘、射干、百合、牡丹皮、麦冬;有显著的激活作用的有红景天、白茅根、五味子、薄荷、木蝴蝶;无显著作用的有赤芍、柴胡.
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