【摘 要】
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近年来,microRNAs(miRNAs)的发现将干细胞分化的调控研究引入转录后水平时代.已有研究表明,miRNA与Notch信号通路存在广泛的串话,其中miR-34a已被报道在多种疾病的发生发展中
【机 构】
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四川大学华西口腔医学院,牙体牙髓科教研室,四川大学,成都,610041
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近年来,microRNAs(miRNAs)的发现将干细胞分化的调控研究引入转录后水平时代.已有研究表明,miRNA与Notch信号通路存在广泛的串话,其中miR-34a已被报道在多种疾病的发生发展中起到了重要的调控作用.Notch信号通路成员在根尖牙乳头干细胞SCAP中的分布模式及miR-34a与Notch信号通路串话调控细胞分化至今尚未见报道.分离培养SCAP细胞,常规PCR和免疫荧光染色分析Notch信号通路成员在SCAP细胞中的表达.利用Notch信号通路的激动剂JAG1重组蛋白和抑制剂DAPT处理体外培养的SCAP,实时定量荧光PCR检测miR-34a和成牙和成骨向分化各相关基因的变化.体外培养的SCAP转染miR-34a模拟物及抑制物,qRT-PCR及western blot检测Notch信号通路各成员及分化相关基因及蛋(DSPP,ALP,RUNX2,OSX,OCN,OPN)的变化.通过双荧光素酶报告基因检测验证miR-34a对NOTCH2及HES1的直接作用.研究表明，Notch信号通路抑制SCAP细胞成牙和成骨向分化，参与维持其未分化状态和自我更新。miR-34a通过识别并负性调控NOTCH2及HES1，与Notch信号通路串话促进SCAP的成骨和成牙向分化。
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