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目的：建立微流控芯片电泳分离血清脂蛋白的方法,并探讨其在致动脉粥样硬化脂蛋白谱研究中的临床应用价值.
方法：利用自制的石英微流控芯片,选择Tricine缓冲液作为电泳缓冲液,纳米金作为添加剂,分离经硝基苯并噁二唑-C6-酰基鞘胺醇(NBD C6-ceramide)预染的脂蛋白,激光诱导荧光技术检测.研究荧光染料NBD C6-ceramide与脂蛋白结合的特异性、饱和性和稳定性;研究芯片电泳分离血清脂蛋白的线性范围、检测限和重现性;研究微流控芯片电泳分离血清脂蛋白与临床生化血清脂蛋白测定的相关性.研究血清保存方式、检测时间对脂蛋白电泳行为的影响;微流控芯片电泳分析53例动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)患者与治疗前后的血清脂蛋白水平;对比颈动脉粥样硬化患者治疗前后的脂蛋白微流控芯片电泳图谱与颈动脉血管超声检查结果.
结果：NBD C6-ceramide与脂蛋白结合具有特异性、饱和性、稳定性,适合于对脂蛋白进行定量分析;大而轻低密度脂蛋白(ILDL)、小而密低密度脂蛋白(sdLDL)、VLDL和HDL在3分钟内实现基线分离;ILDL,sdLDL,VLDL和HDL微流控芯片电泳的线性范围和检测限(S/N=3)分别为：0.01～0.8,0.04～1.0,0.04～1.0,0.02～0.8mg/L;检出限分别为：5,5,15和8μg/L,对健康体检者的血清样品连续5次测定,1LDL,sdLDL,VLDL和HDL的峰面RSD分别为3.5％,2.2％,4.5％,3.9％;两种方法测定HDL-C与LDL-C相关系数分别为0.93,0.91;血清冰冻-70℃保存三月、血清采集后四小时内分析结果不受影响;AS患者治疗后sdLDL与VLDL水平增高,HDL水平降低,均与治疗前存在显著差异.颈动脉AS患者治疗前后颈动脉超声及脂蛋白微流控芯片电泳结果显示,基于微流控芯片的血清脂蛋白分析可望实现AS的疗效观察.
结论：微流控芯片电泳操作简单、快速、高效、低耗,可望成为血清脂蛋白及其亚型临床常规分析的新手段;基于微流控芯片的致动脉粥样硬化脂蛋白谱分析,对评价动动脉粥样硬化危险因素,实现对动脉粥样硬化的早期检测、预防、疗效观察及有效制定动脉粥样硬化防治策略具有重大意义.