【摘 要】
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目的:本研究将白细胞介素12基因转入小鼠的EL-4细胞,尝试用活的转基因细胞进行癌疫苗治疗的可能性.方法:本研究将小鼠IL-12基因片段插入逆转录病毒载体,构建了TFG-mIL-12-Neo表达载体.再导入EL-4胸腺瘤细胞,经单抗和FACS分析,ELISA生物活性测定等方法筛选高表达的细胞株,通过体内实验检测转基因细胞的肿瘤原性,免疫原性及癌疫苗作用.结果:经生物学检定,转基因癌细胞EL-4/I
【机 构】
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哈尔滨医科大学肿瘤研究所生物治疗研究室 中国 哈尔滨 150040 东京大学医学科学研究所附属病院
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目的:本研究将白细胞介素12基因转入小鼠的EL-4细胞,尝试用活的转基因细胞进行癌疫苗治疗的可能性.方法:本研究将小鼠IL-12基因片段插入逆转录病毒载体,构建了TFG-mIL-12-Neo表达载体.再导入EL-4胸腺瘤细胞,经单抗和FACS分析,ELISA生物活性测定等方法筛选高表达的细胞株,通过体内实验检测转基因细胞的肿瘤原性,免疫原性及癌疫苗作用.结果:经生物学检定,转基因癌细胞EL-4/IL-12的表达量为30.75ng/106细胞/24小时.将此细胞克隆化并加以扩增,接种至C57BL/6小鼠右侧背部,发现10天之内所有的实验动物都发生了肿瘤,经一段时间观察,大部分肿瘤都相继消退或消失.将排斥了肿瘤小鼠的左侧背部在接种1x105野生型癌细胞(EL-4/Wt细胞),发现83％的小鼠排斥了再接种的癌细胞,并无瘤生存达100天以上.用单克隆抗体进行体内淋巴细胞消除CTL检测,证明接种了转基因细胞小鼠体内CTL细胞活性显著提高.参与免疫排斥的细胞主要是CD8+,CD4+细胞,NK细胞也部分参与了排斥过程.结论:上述的实验结果证实导入IL-12基因的EL-4/IL-12细胞的肿瘤原性下降,免疫原性增强,特别值得指出的是接种的转基因细胞未经放射或高压处理等方法灭活,而是直接注射活的转基因细胞.结果提示这一尝试是成功的.其中一个重要的因素是转导的癌细胞有着较高的表达量,且IL-12是目前公认的对肿瘤具有最强作用的细胞因子.如果进一步提高表达量相信会取得更好的研究结果.这为将来应用活的转基因细胞作为癌疫苗的研究及临床实践打下了理论及实验基础.
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