【摘 要】
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背景：紧密连接是肠上皮细胞间的主要连接方式,在维持肠上皮细胞正常通透性中发挥重要作用.促肾上腺皮质激素释放因子(corticotropin releasing factor,CRF)属应激反应因子
【出 处】
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第八届浙江国际消化病学术大会暨美国胃肠病协会第二届中国学术论坛
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背景：紧密连接是肠上皮细胞间的主要连接方式,在维持肠上皮细胞正常通透性中发挥重要作用.促肾上腺皮质激素释放因子(corticotropin releasing factor,CRF)属应激反应因子,能够引起肠上皮细胞通透性的改变,前期研究发现细胞角蛋白8 (CK8)参与IBS肠上皮细胞通透性的改变,有研究提示角蛋白为应激相关蛋白,CRF是否可以引起CK8表达升高从而作用于紧密连接相关蛋白引起肠上皮细胞通透性改变需要进一步研究.目的：探讨CRF通过CK8介导紧密连接蛋白对人肠上皮细胞间通透性的影响.方法：利用T84细胞株建立肠上皮屏障模型,采用免疫荧光法检测T84细胞表面CRFR1及CRFR2受体,并将其分为对照组和CRF处理组,CRF处理组以100nM CRF处理细胞24h,采用投射电镜观察两组紧密连接结构变化,免疫荧光检测两组CK8、肌动蛋白(F-actin)及紧密连接相关蛋白(ZO-1、Claudin-1、Occludin)的表达,蛋白质印迹法检测相应蛋白表达量的变化,RT-qPCR检测CK8 mRNA的转录水平,应用transwell小室检测两组FITC标记的Dextran透过率情况,采用基因杂交测序检测CRF处理2h后与正常组RhoA mRNA的表达变化.结果：T84细胞表面存在CRFR1及CRFR2受体,CRF处理后T84细胞CK8的荧光强度增高,F-actin外周轮廓模糊,ZO-1和Claudin-1荧光减弱、Occludin胞内颗粒样浓聚.与对照组相比,CRF处理组CK8的蛋白表达明显增加(P＜0.05),Occludin、claudin-1和ZO-1表达下调(P＜0.05),并上调CK8 mRNA的表达(P＜0.05).FITC标记的Dextran透过率,CRF处理组较对照组明显增高(P＜0.05).另外,CRF处理2h后,RhoA mRNA表达增高.结论：CRF引起CK8表达上调,并可能通过RhoA活化介导F-actin重排及紧密连接蛋白改变,从而引起肠上皮细胞间的通透性增加.
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