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目的：禽流感严重危害畜牧业，而人类感染禽流感病例的出现使得其更加受到公众的关注.因此，作为防控禽流感的有效手段，安全有效的新型禽流感疫苗研究迫在眉睫.为研究堆型艾美耳球虫作为活载体表达及运输禽流感病毒抗原的可能性，我们构建了表达禽流感病毒M2e抗原的转基因堆型艾美耳球虫.方法：我们构建了融合表达多拷贝M2e基因、黄色荧光蛋白(YFP)、红色荧光蛋白(RFP)和乙胺嘧啶抗性基因(DHFR-TS3m)的球虫转染载体，将其转染堆型艾美耳球虫子孢子后，经翅下静脉将转染的子孢子接到鸡体内.收取接种后5-9天的卵囊并在荧光显微镜下观察.通过流式细胞术分选出表达黄色荧光的卵囊并口服接种鸡，同时在饲料中添加100 mg/kg的乙胺嘧啶进行药物压力筛选，收集后代卵囊.此后进行连续的流式分选和药物压力传代.结果：通过静脉接种转染的艾美耳球虫子孢子，我们得到了第一代发荧光的卵囊，通过流式细胞术分选出发荧光的卵囊270个，发光率为0.3％.在100 mg/kg乙胺嘧啶药物筛选下，第二代卵囊发光率达到3％.结论：本研究实现了堆型艾美耳球虫的稳定转染，为后续进行基于转基因堆型艾美耳球虫的禽流感免疫保护研究提供了良好开端.