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目的 建立重组人牙骨质蛋白1(cementum protein 1,CEMP1)(recombinant cementum protein 1,rhCEMP1)大量提取方法.研究从rhCEMP1对纳米羟基磷灰石晶体长的调控作用.方法 将CEMP1的mRNA序列经过密码子人优化后合成质粒pET-28a-CEMP1,质粒转化入大肠杆菌BL21中,诱导蛋白表达.用Ni柱纯化分离获得人重组CEMP1蛋白.BCA法测定浓度,Western blot鉴定其属性,SDS-PAGE测量相对分子质量.取纯化鉴定后蛋白诱导人牙周膜细胞,Q-PCR鉴定细胞CEMP1mRNA表达.通过生物仿生矿化的方法合成rhCEMP1/磷灰石复合物,改变实验条件中的蛋白种类(BSA,rhCEMP1)、蛋白浓度(0,50 μg/ml,100 μg/ml,200 μg/ml)、反应温度(4℃,37 ℃,50 ℃)及反应时间(24 h,48 h),,使用CaCl2作为钙源,Ca终浓度为2.5 mM；(NH4)2HPO4储为P源,磷酸根终浓度为1.5 mM.未加入蛋白的设为空白对照组.分别加入BSA 200μg/ml,CEMP1 50、100、200μg/ml,混合后用2N氨水NH4OH调节pH值为8.0 ；分别放置于4℃、37℃、50℃；反应24或48个小时.通过透射电镜、选区电子衍射、能量色散X射线光谱仪分析上述因素对在rhCEMP1调控磷灰石晶体生长中的作用.结果 分离纯化后得到可与CEMP1抗体特异性结合的蛋白,浓度为0.55mg/ml,分子量为34kDa.400mM咪唑洗脱的样品,纯度＞95％.此蛋白诱导人牙周膜细胞后可使其CEMP1 mRNA表达量升高.与BSA组相比,不同浓度的重组蛋白诱导组CEMP1mRNA表达量均上调,不同浓度的诱导效应不同,上调约为原来的1.5～3倍.该结果与文献中用含cemp1基因的质粒转染细胞后,细胞的CEMP1表达上调相一致.重组人牙骨质蛋白1对磷灰石晶体的生长具有明显调控作用.与加入牛血清蛋白组及空白对照组相比,纳米羟基磷灰石沿c轴高度择优生长长径比增大形貌由短棒状调控为针状.蛋白的浓度高于100μg/ml时,纳米羟基磷灰石无序团聚,说明100μg/ml是CEMP1与纳米羟基磷灰石的饱和吸附临界点.能谱分析显示CEMP1诱导的矿化晶体钙磷比Ca/P为1.33,与生物型羟基磷石前体磷酸八钙的Ca/P比1.33极为相似.晶体的成长时间必须达48小时才能有效形成生物型结晶体.4～50℃的反应温度对磷灰石晶体的生长无明显影响.结论 原核系统获取的rhCEMP1与真核系统的具有相似的细胞诱导和晶体诱导调控作用.实验证实蛋白种类、浓度及反应时间对晶体的生长具有显著的影响,而反应温度则无明显影响.rhCEMP1有望成为牙周组织工程中牙骨质再生瓶颈的突破点.