目的:抗肾小球基底膜(glomerular basement membrane,GBM)病是以循环中出现抗GBM抗体和/或抗体在脏器中沉积为特征的一组自身免疫性疾病。抗GBM抗体的主要靶抗原已证实为IV型胶原α3链的非胶原区1[α3(IV)NC1]。因此重组并纯化人类α3(IV)NC1,对于该病的临床诊断及发病机制的研究都有着重要意义。目前国内尚缺乏此项技术的报道和使用。方法:1.本实验构建真核表达载体,采用重组质粒转化表达菌株诱导α3蛋白表达,无血清培养基培养分泌表达α3融合蛋白的工程细胞株人胚肾细胞系(HEK293细胞),并收集培养上清,通过离心、过滤、亲和层析等方法对目的蛋白进行纯化。2.采取丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定蛋白质的纯度和分子量,酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)鉴定蛋白质的抗原性。结果:采用上述方法,可以成功建立能够稳定分泌表达人类α3(IV)NC1的人胚肾细胞系。经过收集分离纯化工艺优化后,目的蛋白的得率由31%提高到78%,可以获得大量的重组蛋白。目的蛋白质通过SDS-PAGE鉴定后,其纯度为98%,分子量为27KD。经ELISA方法鉴定后,蛋白质的抗原性优于仅通过纯化传统方法获得的人类GBM抗原。结论:本研究在国内首次成功构建了稳定分泌表达人类α3(IV)NC1的人胚肾细胞系,并纯化得到大量的重组蛋白。该方法技术成熟,目的蛋白的得率、纯度和抗原性均较高,为后期制备校准品和单克隆抗体提供了条件,并且为临床诊断和机制研究奠定了基础。