【摘 要】
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本课题组近年的研究表明,POU同源盒基因Brn-4在海马神经再生过程中表达增高.为了更好地研究Brn-4在神经再生中的作用,本实验在构建Brn-4过表达载体和干扰载体的基础上,将其转染至体外培养的神经干细胞和新生神经元之中,应用免疫细胞化学技术检测Brn-4在细胞中的表达定位、应用Real-time PCR及Western blot等方法检测Brn-4基因及蛋白的表达,以明确Brn-4在神经元分化
【机 构】
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南通大学医学院人体解剖学系 南通226001
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本课题组近年的研究表明,POU同源盒基因Brn-4在海马神经再生过程中表达增高.为了更好地研究Brn-4在神经再生中的作用,本实验在构建Brn-4过表达载体和干扰载体的基础上,将其转染至体外培养的神经干细胞和新生神经元之中,应用免疫细胞化学技术检测Brn-4在细胞中的表达定位、应用Real-time PCR及Western blot等方法检测Brn-4基因及蛋白的表达,以明确Brn-4在神经元分化及成熟过程中所起的作用.
其他文献
大鼠脊髓发育过程中,经典的Wnt信号通路发挥着重要的作用,但其机制尚不完全明确,与BDNF信号通路之间是否存在Crosstalk亦不明确.本实验采用孕18～20 d大鼠的胚胎,取脊髓组织进行神经干细胞和神经元的培养,分为正常对照组、Wnt蛋白上调组、Wnt抗体干扰组,检测BDNF及Wnt信号通路下游相关因子的表达变化,初步确定两条通路之间Crosstalk 的关键因子可能是GSK-3β.
为观察黄芪甲苷对大鼠脑出血灶周围凋亡神经元形态与凋亡相关蛋白及其基因的作用,本实验选用体重300g的成年雄性SD大鼠120只,应用脑立体定位仪于大鼠尾壳核注入肝素化V型胶原酶建立脑出血模型.各组SD大鼠于脑出血模型制作后0h开始腹腔注射黄芪甲苷(4mg·kg-1 ·d-1)进行干预.通过神经行为学评分,免疫组织化学染色,RT-PCR和电镜等方法观察各组大鼠的神经行为学变化,及其脑出血灶周围超微结构
缺氧缺血脑损伤后脑组织细胞内某些蛋白质表达发生变化,影响损伤后细胞的修复、再生和凋亡.本实验利用新生SD大鼠制成缺氧缺血脑损伤模型.利用2D电泳法对损伤大鼠大脑皮层进行蛋白质组分析,对差异蛋白点进行质谱分析鉴定.免疫印迹法分析相关蛋白在不同日龄HIBD大鼠脑细胞中表达及其磷酸化修饰的变化.2D电泳分析在分子量63kD、pH7.5左右有一明显表达升高的蛋白,经质谱分析鉴定,该蛋白为脑衰蛋白反应调节蛋
观察大鼠脊髓半损伤不同时间段内前角运动神经元和髓鞘超微结构变化,为脊髓损伤后形态学改变提供依据.雄性Wistar大鼠45只,随机分为正常对照组和脊髓半损伤手术8h、1d、3d、7d、14d、21 d、28 d、60 d组,每组5只.手术组用改良Allen装置造成T12右半侧损伤.用4％多聚甲醛、2％戊二醛混合液灌流固定,取损伤处2mm以下脊髓.常规电镜样品制备,电镜观察.结果显示,正常对照组脊髓前
研究大鼠脊髓胸段半损伤后损伤段下部(腰段)前角运动神经元5-HT2AR免疫反应的变化,为进一步弄清脊髓损伤后的病生理学变化机制提供形态学数据.用Wistar大鼠64只,依时间段随机分成8组(8h、1d、3d、7d、14 d、21 d、28 d、60 d组),各组又分为手术组和假手术组,每组4只.手术组用改良Allen装置以26.68 g×3 cm的动量垂直打击右半侧脊髓,造成T12脊髓节段右半侧损
应用黄芩茎叶总黄酮(SSTF)预处理实验大鼠,研究其对缺血再灌注脑组织预防性保护作用.本实验用SD大鼠90只,随机分为5组:假手术组(sham组),缺血再灌注模型组(IR组),SSTF预处理Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,每组18只;造模前1周SSTFⅠ、Ⅱ、Ⅲ组分别给SSTF(50 mg、100 mg、200 mg)·kg-1·d-1;IR组和sham组给予等量生理盐水.
探讨移植转GDNF基因的BMSCs对大鼠脑出血后神经细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响.本实验采用向SD大鼠脑尾壳核注射胶原酶和肝素建立脑出血模型,随机分为BMSCs组、GDNF/BMSCs组和生理盐水组,并于建模后第3d在脑出血部位分别移植BMSCs、GDNF/BMSCs以及生理盐水;各组又根据细胞移植后再分为2个亚组(1周、2周),每亚组8只大鼠.
高压培养后RGC-5出现程序性坏死,但其分子机制不明.calpain能通过BID剪切、活化,使线粒体内成熟凋亡诱导分子tAIF大量释放导致染色质溶解,从而介导程序性坏死.因此本实验拟通过使用开放式加压培养系统对RGC-5进行高压培养(100 mmHg)拟研究calpain在高压培养后RGC-5中的的表达,下游产物tAIF和程序性坏死的情况,从而阐明calpain可能在高压后RGC-5程序性坏死中的
SCN9A选择性高表达在脊髓背根神经节,编码电压门控钠离子通道Nav1.7的α亚基.在神经病理性痛中Nav1.7的表达及作用尚有争议.本实验体外培养新生大鼠的DRG神经元,经鉴定纯度达到95％,采用免疫荧光双标的方法观察DRG神经元Nav1.7的表达,构建慢病毒载体si-SCN9A RNA转染体外培养的DRG神经元,沉默SCN9A,观察其对Nav1.7表达的抑制情况和膜电位水平的变化.
为了观察穹窿海马伞切割后不同时间点海马内RUNX1T1 mRNA和蛋白的表达变化及定位,本实验行穹窿海马伞切割术,制备模型大鼠.实验分为正常组、切割3、7、14、21、28 d组,分别提取海马组织总mRNA和总蛋白,用Real-Time PCR和Western blot检测大鼠海马组织中RUNX1T1 mRNA和蛋白的表达;脑冰冻切片进行RUNX1T1免疫荧光检测.