【摘 要】
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采用差速离心和蔗糖非线性密度梯度离心法提纯高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒LXB-PRRSV-36-07株,免疫BALB/c小鼠,按常规杂交瘤技术制备杂交瘤细胞株,经间接ELISA筛选和克隆化,获得5株能稳定分泌PRRSV抗体的单克隆杂交瘤细胞株,分别命名为D5、D7、D10、E9和B5.ELISA交叉实验表明,5株单抗均具有高度特异性,与猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病毒(PRV),猪圆环病毒(P
【机 构】
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中国农科院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室 猪传染病学研究室 哈尔滨 150001 东北农业大学动物医学院 哈尔滨 150030
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会
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采用差速离心和蔗糖非线性密度梯度离心法提纯高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒LXB-PRRSV-36-07株,免疫BALB/c小鼠,按常规杂交瘤技术制备杂交瘤细胞株,经间接ELISA筛选和克隆化,获得5株能稳定分泌PRRSV抗体的单克隆杂交瘤细胞株,分别命名为D5、D7、D10、E9和B5.ELISA交叉实验表明,5株单抗均具有高度特异性,与猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病毒(PRV),猪圆环病毒(PCV)均不反应.阳性杂交瘤细胞上清效价分别是1:300、1:500、1:400、1:600、1:500;腹水效价分别1:12800、1:25600、1:6400、1:12800和1:6400.经过鉴定,D5和B5两株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体亚类为IgG2b,D7、D10和E9为IgM,而且所有单抗的轻链为κ链.western blot 试验说明5株单抗均是针对N蛋白的特异性单抗.
其他文献
利用PCR技术从带有伪狂犬病毒(PRV)gE基因的重组质粒pMD18-T-gE中扩增回收约304 bp大小的片段,并制备出地高辛标记的gE基因核酸探针.特异性检测结果表明,该探针能与重组质粒DNA发生特异性杂交,而与对照的PRV Bartha-k61株疫苗毒DNA.猪细小病毒(PPV)DNA、猪圆环病毒(PCV)DNA、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)cDNA、猪瘟病毒(CSFV)cDNA的杂
根据发表的猪圆环病毒2型(PCV 2)ORF2基因序列,设计合成一对特异性引物,从分离到的PCV 2吉林株(JL 01)中扩增出PCV 2 ORF2 579bp的核苷酸片段,经BamHI和HindⅢ晦切后转入到表达栽体pET-32a,经鉴定获得阳性重组表达质粒pET-32a-ORF 2,将其转化到表达宿主菌BL21中,经IPTG诱导,成功表达了ORF2基因编码的部分结构蛋白,分子量为40Ku,表达
为了研究猪圆环病毒2型(PCV2)核酸疫苗,本研究采用重叠延伸PCR(splicing by overlap extension-PCR,SOE-PCR)方法通过一基因柔性接头(linker)(G4S)3将PCV2的ORF2全长基因和猪白介素2成熟肽基因(PoIL-2)构建成PCV2-linker-PoIL-2嵌合基因并克隆入pcDNA3.1(+)真核表达栽体中;筛选阳性重组表达质粒(rpcDNA
在中国的猪血清中分离到一新因子,命名为P2.P2为闭合环状基因组,全长993个核苷酸.序列分析表明其与猪圆环病毒密切相关.随后对构建的P2因子分子克隆的体外感染性进行了研究.结果表明,在转染PK-15细胞后,只有P2因子的双拷贝串联分子克隆具有感染性,表现为可在细胞的胞浆和胞核中形成包涵体,胞浆包涵体为圆形或不规则性,直径0.1～0.4 μm;胞核包涵体有两种类型,一种为小而圆,直径约0.1μm的
近年来,随着我国畜牧业生产快速发展,国内外贸易日趋繁荣.但由于牲畜流动频繁、饲养管理粗放、免疫不到位等原因,猪圆环病毒Ⅱ型(PCV-2)及其并发其它猪病的混合感染普遍流行,严重危害养猪业的发展。猪圆环病毒病的病原为圆环病毒Ⅱ型(PCV-2),是近年来新发现的一种新的免疫抑制病,包括:断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)、猪皮炎和肾病综合症(PDNS)、母猪繁殖障碍、猪间质性肺炎、传染性先天性震颤五
猪2型圆环病毒感染是近年来仔猪发生断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)和肾炎皮炎综合征的的重病因,该病给养殖业带来严重的经济损失.早期诊断并采取综合的措施是防治本病的关键措施.本文用建立的PCR检测方法,对华中地区规模化猪场送检的274头猪769份不同组织样品进行了检测,共有90头猪为PCV2感染阳性,阳性率为32.85％.阳性病料数为134份,病料阳性率为17.43％;在各个被检组织的检出率中,肺
为了明确河北部分地区猪圆环病毒2型(PCV2)流行毒株的基因型及其毒力,应用免疫过氧化物酶单层实验(IPMA)对从保定、唐山和衡水分离的3株PCV2进行了鉴定,分别命名为PCV2-BD1A,TSh1和HSh1.以PCV2cap基因为靶基因,运用PCR-RFLP技术将3个分离株鉴定为2H基因型(分离株BD1A和TSh1)与2I基因型(分离株HSh1)2个基因型,该结果提示2H基因型仍然是最近河北地区
为分析某猪场出现"僵猪"的可能性原因,对该猪场的11头"僵猪"采集血液样品,用RT-PCR方法检测猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),用PCR方法检测猪伪狂犬病病毒(PRV)和猪圆环Ⅱ型病毒(PCV-2).结果11份样品的CSFV、PRRSV及PRV检测均为阴性,PCV-2经套式PCR检测均为阳性.对11份样品分离血清,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测PCV-2血清抗
从临床上表现为仔猪断奶多系统衰竭综合征(PMWS)的病死猪中,取淋巴、脑等组织病料.扩增猪圆环病毒2型(PCV2)主要结构蛋白基因ORF2,证实为PCV2阳性病料组织后,接种到无PCV1污染的传代PK-15细胞分离培养, 培育成1株.PK-15传代细胞培养适应毒, 命名为WH株.分离毒株经连续传代培养20代,对传代细胞病毒液经间接免疫荧光检测可见PCV特征的荧光斑,而胞浆中无荧光斑:用PCR证
为探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染性cDNA克隆作为外源基因表达载体的可行性以及利用重组病毒对PRRSV复制转录过程进行分析.以北美株PRRSV感染性克隆pAPRRS为平台进行反向遗传操作,在pAPRRS的ORF1和ORF2间插入猪圆环病毒(PCV2)的主要免疫原开放阅读框架(ORF),构建了全长嵌合cDNA克隆pCPV,随后进行了病毒拯救及对拯救病毒vCPV复制转录分析.结果发现:v