【摘 要】
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目的 观察人骨髓充质干细胞(BM-MSCs)移植对大鼠烧伤治疗作用,并探求其机制.方法 骨髓来源于己取得知情同意书的第三军医大学附属西南医院正常成年人,分离培养BM-MSCs,流式细胞术检测鉴定细胞其表面标记CDl05、CD73、CD90、CDl9、CD45.构建带有绿色荧光蛋白(GFP)的空载慢病毒并且转染稳定传到4-5代对数生长期的BM-MSCs,倒置显微镜和荧光倒置显微镜观察BM-MSCs的
【机 构】
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510080 广东省广州市中山大学附属第一医院烧伤科
【出 处】
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第十届全国烧伤救治专题研讨会暨福建省第八次烧伤外科学术研讨会
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目的 观察人骨髓充质干细胞(BM-MSCs)移植对大鼠烧伤治疗作用,并探求其机制.方法 骨髓来源于己取得知情同意书的第三军医大学附属西南医院正常成年人,分离培养BM-MSCs,流式细胞术检测鉴定细胞其表面标记CDl05、CD73、CD90、CDl9、CD45.构建带有绿色荧光蛋白(GFP)的空载慢病毒并且转染稳定传到4-5代对数生长期的BM-MSCs,倒置显微镜和荧光倒置显微镜观察BM-MSCs的生长情况和转染GFP之后的BM-MSCs.选用1.8-209雄性ICR小鼠,随机分为烧伤后对照组及烧伤后BM-MSCs移植治疗组,复合麻醉剂腹腔注射麻醉后制备小鼠烧伤模型；观察两组小鼠烧伤后的创面愈合情况及其愈合率,同时用HE染色观察大鼠烧伤局部皮肤组织的病理结构,比较BM-MSCs的治疗效果.分别收集烧伤后7天和14天的治疗组及对照组大鼠损伤局部的皮肤组织,抽提蛋白,免疫组化检测皮损中成纤维细胞及新生血管的数量.并且采用小鼠烧伤后3天后通过尾静脉注射的方式运用活体动物成像仪观察BM-MSCs在体内的分布情况.结果 采用贴壁法培养UC-MSCs,细胞呈成纤维样的细胞形态,细胞之间相互连接,表现为成纤维状细胞特有的形态.分离得到的细胞经流式细胞检测结果 提示：其表面标记CDl05、CD73、CD90表达阳性率大于95％；CDl9、CD45表达阳性率小于2％.成功构建稳定表达的慢病毒,感染BM-MSCs效率为87.5％.小鼠烧伤后,创面轻度肿胀,创面为黄白色,无水泡形成,活动自如,反应较敏捷.烧伤后第二天,创面颜色变深,创面出现散在的红色斑块,形状不规则.第三天时创面呈现灰白色,并出现痂皮,触之较硬.统计各组的愈合时间,发现UC-MSCs移植治疗组大鼠创面愈合时间为22±3.1天,对照组则为27±3.1天.切痂术后14天开始,UC-MSCs移植治疗组的愈合率(56.3％)与对照组(47.2％)相比较存在明显差异,移植治疗组大鼠创面的愈合率较对照组显著加快.疗组显著减少；切痂术后21天,各组创面均可见表皮层有较多的坏死细胞及新生的肉芽组织,毛细血管数量增多,胶原含量丰富.其中移植治疗组创面中各层次的结构较对照组清晰,且新生的成纤维细胞数量较对照组显著增加.在小鼠烧伤后14天,大量的新生血管开始出现,密度是532/mm2,这是显著的高于对照组(425/mm2).第三天后通过尾静脉注射的BM-MSCs在第7天在活体成像仪中只看到在创面上分布.结论 人骨髓间充质干细胞对创面的愈合有明显作用.
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