本文在嗜热古菌Thermococcus kodakarensis KOD1¹中过表达了一个来自于嗜热菌T. kodakarensis的可溶性[NiFe]-氢酶²,并且通过构建12XHis标签得到了高于本底酶470倍的纯的氢化酶。纯化后的12XHis-氢酶在80℃条件下,基于氧化态紫精苄基（BV）和H₂的特异性酶活为1066 U/mg。该酶具有良好的耐热性,在80℃下热失活的半衰期为4800±170 min,在90℃下热失活的半衰期为45±4 min。基于此酶的优良特性,我们设计了一种包含Tk氢酶、NAD依赖性葡萄糖脱氢酶（GDH）和黄递酶（DI）³的三酶仿生途径,该途径中含有一种非生物电子中介体BV,而DI和BV促进了从NADH到氢化酶的快速电子转移,从使反应利用葡萄糖更快速产生葡萄糖酸盐和氢气。与之前报道的两酶途径4相比（无DI和BV）,这种仿生途径具有生产率更快、辅酶（NAD）成本更低和反应温度更高的优良特点。