【摘 要】
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建立一种用反相高效液相色谱(RP-HPLC)同时测定血浆乙精氨酸和L-瓜氨酸浓度的方法并应用于临床。血浆样本用三氯乙酸及在75～肋80℃温育15min除蛋白,离心10000g,15min后,上清液
【机 构】
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上海同济大学附属东方医院中心实验室上海同济大学附属东方医院肿瘤科上海同济大学附属东方医院消化内科,上海200120
【出 处】
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第十五届全国有机分析及生物分析学术研讨会
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建立一种用反相高效液相色谱(RP-HPLC)同时测定血浆乙精氨酸和L-瓜氨酸浓度的方法并应用于临床。血浆样本用三氯乙酸及在75～肋80℃温育15min除蛋白,离心10000g,15min后,上清液用苯基异硫氰酸酯(PITC)溶液衍生化,氮气吹干,流动相A定客。梯度洗脱,流动相A;500mL含4.77gNaAc,12.5mL乙腈,125μL10mmol/LEDTA;流动相B;由75mL甲醇,225mL乙腈及200mL超纯水混合组成。采用PICO-TAG色谱柱[300×3.9mm,5μm]分离样本,柱温46℃,流速1.0mL/min,进样量20μL,紫外检测器检测,波长254nm。L-精氨酸和L-瓜氨酸浓度线性范围0～1000μmol/L,线性回归方程分别为Y=892.1697+4278.031X(Syx=6767.05,Sa=2757.27,Sb=7.167)及Y=15531.02+4272.131X(Syx=30160,Sa=13345,Sb=33.99),两者r2均大于0.9999;精氨酸和瓜氨酸的方法检测限分别为0.0476μmol/L和0.0201,μmol/L,定量下限(LOQ)分别为0.448μmol/L和0.240,μmol/L。日內变异系数CV(％)分别为3.2％和3.4％,日间变异系数CV(％)分别为4.9％和7.2％。平均回收率分别在86.69％～93.06％及86.22％～118.9％之间。用本法测定的39例健康人(男23例,女21例,23～73岁)血浆L-精氨酸和L-瓜氨酸浓度分别为58.19±16.43μmol/L及60.77±9.18μmol/L。乙采用三氯乙酸沉淀血浆蛋白并加温,减少了热变性蛋白的干扰并有利于延长色谱柱的使用寿命;所建方法灵敏、重现性好、结果可靠,可应用于临床和科研。
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