【摘 要】
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为了构建柑橘叶点霉亚洲种Phyllostica citriasiana菌株高效稳定的遗传转化体系,获得标记绿色荧光蛋白GFP的突变菌株,以便观察其潜伏侵染特性,本实验对影响该菌原生质体释放和再生的重要因子进行系统研究.结果表明,在液体完全培养基CM、26～28℃及100rpm条件下培养3d的菌丝,以0.7mol/L Nacl作为渗透压稳定剂,应用15mg/mL裂解酶和10mg/mL崩溃酶的混合酶液
【机 构】
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福建农林大学植物保护学院,福州350002;福建省热带作物科学研究所,漳州 363001 福建农林
【出 处】
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中国植物病理学会2015年学术年会
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为了构建柑橘叶点霉亚洲种Phyllostica citriasiana菌株高效稳定的遗传转化体系,获得标记绿色荧光蛋白GFP的突变菌株,以便观察其潜伏侵染特性,本实验对影响该菌原生质体释放和再生的重要因子进行系统研究.结果表明,在液体完全培养基CM、26～28℃及100rpm条件下培养3d的菌丝,以0.7mol/L Nacl作为渗透压稳定剂,应用15mg/mL裂解酶和10mg/mL崩溃酶的混合酶液,在28℃、90rpm条件下裂解3h,原生质体释放量达3.68×106个/mL.用PEG介导转化法,将原生质体与质粒DNA(含GFP基因和潮霉素B抗性基因)融合并在含有潮霉素B抗性(终浓度为50～ 100μg/mL)的再生培养基中的再生率为0.425‰.本研究首次优化了该菌的原生质体制备和再生的方法,这为进一步对该菌的致病机理进行研究奠定了基础.
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