【摘 要】
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目的 鼻咽癌是我国南方常见的恶性肿瘤之一,放射治疗是鼻咽癌的首选治疗方法,如何增强鼻咽癌对放疗敏感性一直是鼻咽癌治疗学的研究热点.本研究希望通过临床样本分析、体外细胞培养和动物体内实验等方法,探讨miR-17-5p在调控鼻咽癌放疗敏感性中的作用和作用机制,为鼻咽癌放疗敏感性调控的研究和临床干预提供实验依据.方法 使用qRT-PCR检测CNE-1和CNE-2细胞系中及放疗敏感组和不敏感组患者临床样本
【出 处】
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中华医学会2016全国耳鼻咽喉头颈外科中青年学术会议
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目的 鼻咽癌是我国南方常见的恶性肿瘤之一,放射治疗是鼻咽癌的首选治疗方法,如何增强鼻咽癌对放疗敏感性一直是鼻咽癌治疗学的研究热点.本研究希望通过临床样本分析、体外细胞培养和动物体内实验等方法,探讨miR-17-5p在调控鼻咽癌放疗敏感性中的作用和作用机制,为鼻咽癌放疗敏感性调控的研究和临床干预提供实验依据.方法 使用qRT-PCR检测CNE-1和CNE-2细胞系中及放疗敏感组和不敏感组患者临床样本中miR-17-5p的表达,通过细胞周期实验、MTT实验、Tunel染色、报告基因实验和Pearson相关性检验等方法探讨miR-17-5p对鼻咽癌放疗敏感性可能的调控作用和调控机制.结果 与放疗敏感组CNE-2相比,不敏感细胞系CNE-1中miR-17-5p表达明显升高(p＜0.05),放疗不敏感组临床样本中miR-17-5p表达也显著升高(p＜0.05)；使用miR-17-5p转染CNE-2细胞系后发现,与空白对照组相比,G1期细胞比例明显减少(p＜0.05),细胞集落形成数目显著增加(p＜0.05),MTT结果中OD值明显减低(p＜0.05),提示过表达miR-17-5p可以促进鼻咽癌细胞增殖能力；细胞爬片的Tunel染色发现,过表达miR-17-5p可以显著降低X线照射后鼻咽癌细胞凋亡数量(p＜0.05)；使用Annexin V和PI染色后的流式细胞仪分析结果发现,过表达miR-17-5p可以显著降低单阳性和双阳性细胞比例(p＜0.01),明显抑制X线照射引起的ROS表达量(p＜0.05)；过表达miR-17-5p后移植肿瘤的体积明显大于空白对照组(p＜0.01)；报告基因实验、qPCR和western blot结果发现,过表达miR-17-5p可以明显抑制Pten 3UTR质粒的荧光素酶活性(p＜0.05),使Pten的mRNA水平和蛋白水平明显减低(p＜0.05),同时Pten下游信号通路AKT磷酸化水平明显增加(p＜0.05).结论 miR-17-5p可以抑制靶基因Pten的活性、mRNA和蛋白水平,进而激活Pten下游AKT的磷酸化水平,因此促进了细胞增殖；同时促进了ROS表达使细胞凋亡增加,最终使鼻咽癌细胞对放疗的敏感性降低,鼻咽癌细胞的放疗抵抗增加.
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