【摘 要】
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建立基于Smad3的抗滤过道瘢痕化药物高通量筛选体系,为青光眼滤过道瘢痕化防治药物的研究提供一个理想的技术平台.并利用所建立筛选体系对青光安颗粒剂小规模中药组分库进行阳性组分筛选,检验所建立筛选体系的实用性,初步考察青光安颗粒剂阳性中药组分的分布.最终成功构建了以Smad3顺式作用元件4×COL1A2基序为增强子、以SV40为启动子，以ZsGreenl-DR为报告基因的真核表达载体p4COL1A2
【机 构】
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湖南中医药大学;湖南中医药大学第一附属医院眼科重点学科 湖南中医药大学
【出 处】
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世界中医药学会联合会眼科专业委员会第五届学术年会、中国中西医结合学会眼科专业委员会第十三届学术年会、中华中医药学会眼科分
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建立基于Smad3的抗滤过道瘢痕化药物高通量筛选体系,为青光眼滤过道瘢痕化防治药物的研究提供一个理想的技术平台.并利用所建立筛选体系对青光安颗粒剂小规模中药组分库进行阳性组分筛选,检验所建立筛选体系的实用性,初步考察青光安颗粒剂阳性中药组分的分布.
最终成功构建了以Smad3顺式作用元件4×COL1A2基序为增强子、以SV40为启动子，以ZsGreenl-DR为报告基因的真核表达载体p4COL1A2-ZsGreenlDR。
将真核表达载体p4COL1A2-ZsGreen1DR转染TCFS细胞，经6418筛选后，获得了Smad3反应性报告细胞株TCFS-ZsGreen1DR，即基于Smad3的抗滤过道瘢痕化药物高通量筛选体系。
经TGF-β1诱导表达实验及Smad3 TFD抑制ZsGreen1DR表达实验证实，TCFS-ZsGreen1DR报告细胞株可通过荧光强弱变化敏感地监测Smad3的活性改变，从而反映外源性物质对TGF-β作用的阻断效果，据此可进行抗滤过道瘢痕化药物的筛选。
TCFS-ZsGreen1DR细胞株(基于Smad3的抗滤过道瘢痕化药物高通量筛选体系)具有可靠的稳定性。
成功建立了青光安颗粒剂小规模中药组分库，所含组分38种，为后续研究提供了经验借鉴。利用所建立的筛选体系和24孔板的初步筛选方法，在青光安颗粒剂小规模中药组分库中，筛选出能够抑制TGF-β1效应的中药阳性组分3种，组份编号为2-3-3,2-3-4,3-2-3。证明筛选体系有良好的实用性。
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