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目的:建立兔骺板损伤模型,研究构建的组织工程骺板对骺板损伤的治疗作用.
方法:前期对培养的第1代兔骺板软骨细胞进行了阿里新蓝染色、蕃红花“O”--亮绿染色、Ⅱ型胶原免疫荧光染色和PCR检测Ⅱ型胶原的表达等鉴定.随后用第1代兔骺板软骨细胞与可降解的多孔丝素材料在体外进行复合、培养,构建组织工程骺板.然后建立兔骺板损伤模型,将27只4周龄新西兰大耳白兔随机分3组,每组9只,分别为空白对照组,多孔丝素材料组(SF),细胞复合多孔丝素材料组(SF+Cell).1％戊巴比妥钠(30mg/kg)腹腔麻醉,仰卧位固定,双下肢安尔碘消毒,铺无菌手术巾.取右侧小腿上段前内侧纵形切口,暴露胫骨上端灰白色骺板,用眼科镊子自内向外破坏骺板,外侧达到胫骨结节水平(骺板损伤大于30％),分别植入SF、SF+Cell,设立无移植物组为空白对照组.左侧小腿不作处理,作为自身对照.术后6周做组织形态学检测、X线检查、BrdU免疫组织化学染色观察标记的骺板软骨细胞情况.
结果:1.改良Masson三色染色.观察标本切片:空白对照组蓝色的骺板中断,损伤处未见骺板软骨细胞,近损伤处骺板变形,骺板软骨细胞排列紊乱;SF组损伤处蓝色的骺板厚度明显比未损伤处骺板薄,骺板软骨细胞有类似柱状排列;SF+Cell组损伤处蓝色的骺板的厚度与未损伤处骺板类似,骺板软骨细胞柱状排列情况较未损伤处散乱.2.HE染色结果与改良Masson三色染色结果基本一致.3.X线检查.空白对照组骨桥明显,短缩畸形和成角畸形显著;SF组胫骨上端内侧骺板到内侧关节面的距离,明显小于外侧骺板到外侧关节面的距离,短缩畸形和成角畸形明显;SF+Cell组胫骨上端内侧骺板到内侧关节面的距离,略小于外侧骺板到外侧关节面的距离,存在较小的短缩畸形和成角畸形.所得数据进行统计分析,在短缩畸形和成角畸形上,空白组与SF组、SF+Cell组之间有显著差异(P＜0.05),SF+Cell组与SF组之间有显著差异(P＜0.05).4.BrdU免疫组织化学染色观察SF+Cell组植入的骺板软骨细胞情况.SF+Cell组的切片中观察到多见的呈散在分布的BrdU阳性细胞呈棕褐色,表明体外复合在SF上的骺板软骨细胞植入体内后生长增殖良好.
结论:骺板软骨细胞+多孔丝素材料构建的组织工程骺板治疗骺板损伤是一种先进有效的方法,疗效优于单纯多孔丝素材料的治疗.