【摘 要】
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目的：建立流感疫苗主种子批毒种中外源性禽腺病毒Ⅲ型(egg drop syndrome virus,EDSV)的荧光定量PCR检测方法.并进行验证及初步应用.
方法：针对EDSV六邻体蛋白保守区分别设
【机 构】
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中国食品药品检定研究院实验动物资源研究所,北京100050
【出 处】
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2017年第十五届中国北方实验动物科技年会
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目的：建立流感疫苗主种子批毒种中外源性禽腺病毒Ⅲ型(egg drop syndrome virus,EDSV)的荧光定量PCR检测方法.并进行验证及初步应用.
方法：针对EDSV六邻体蛋白保守区分别设计引物和探针.建立荧光定量PCR检测方法.并验证该方法的线性、特异性、精密性、灵敏性及可行性.采用新建立的荧光定量PCR法针对16株流感疫苗主种子批毒种进行外源性EDSV检测.
结果：该方法的最佳线性范围为1×101～1×104coples/μl,回归曲线为y=-3.385x+39.616,R2＞0.99;与其他种属的腺病毒及流感病毒间均无交叉反应;实验内和试验间Ct值得变异系数(CV)均＜2％;灵敏度为104copies/μl;该方法检测PO代样品的最低检测限为10-4渗入体积比例,血清学方法检测PO-P3代样品的最低检测限为10-2～10-3掺入体积比例.该方法检测16株流感毒种中外源性RDSV的结果均为阴性,与血清学方法检测结果一致.
结论：成功建立了检测EDSV的荧光定量PCR法,提高了检测灵敏度和检测效率,更好地满足了流感疫苗应急检验中快验的要求.
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