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高强度聚焦超声(HIFU)作为一种非侵入性的有效的治疗肿瘤的方式,在临床上有着很好的应用前景,但是,它还是存在定位不够准确,治疗不完全易复发转移的缺点。鉴于此,本课题致力于研究出一种双靶向纳米粒(TPP/Fe304/PLGA),不仅可以在光声成像的引导下实现对肿瘤相对精准的治疗,纳米粒还能够和HIFU治疗后暴露的肿瘤相关抗原相结合,通过阻断PD1-PDL1途径减少肿瘤的免疫逃逸,同时联合Fe304的免疫作用,通过免疫治疗,增强抗肿瘤效果,减少肿瘤的复发和转移。方法 1.纳米粒的制备及基本表征:采用双乳化法制备(TPP/Fe304/PLGA)纳米粒,在光镜、电镜下观察其形态,通过马尔文粒径仪检测其粒径、电位;通过ICP检测Fe304的包封率及载药量;通过流式和共聚焦检测TPP和PLGA球的连接率2.细胞靶向性:为了验证纳米磁靶向性能,分为TFP NPs,TP+磁铁,NPs,TFP NPs+磁铁三个组,将纳米粒和4T1细胞共孵育0.5h后,在激光共聚焦显微镜下观察其细胞磁靶向效果。同时,为了验证多肽的靶向性,分为TFP NPs,FP NPs,TFP NPs+拮抗剂三个组,将纳米粒和4T1细胞共孵育0.5h,1h,2h后,在激光共聚焦显微镜下观察两种纳米粒对细胞的靶向效果.3.体内外光声成像:体外光声成像分为3个组,TFP NPs,TP NPs,TP NPs,配置不同浓度的纳米粒,检测不同浓度纳米粒光声成像效果;建立乳腺癌Balb/c原位瘤模型并将荷瘤鼠随机分为3组:FP NPs、TFP NPs、TFP NPs+磁铁,经尾静脉注射上述三种纳米粒,采集肿瘤区域不同时间点的光声成像图,定量分析各组光声信号强度值。实验结果 1.基本表征:TFP NPs光镜下大小均一、分散均匀,扫描电镜和透射电镜下观察,呈球形,大小均一、形态规则;马尔文粒径仪测得TFP NPs的粒径分别为307.9 nm,Zeta电位为+21.4 mV。Fe304的包封率为51%,载药量为5.89%;通过共聚焦定性检测TPP成功连接上纳米粒,通过流式定量检测出TPP的连接率为72.65%.2.细胞靶向效果:在有磁铁的靶向组,4T1细胞周围可见大量纳米颗粒,而非靶组没有明显纳米粒聚集。随着时间的延长,靶向组的细胞周围有越来越多的纳米粒聚集,而非靶组和拮抗组,没有明显纳米粒聚集。3.体内外光声成像:体外光声显像中,TFP NPs光声信号随着其浓度的增加而增强;体内光声成像中,肿瘤部位的光声信号强度随着时间的延长而逐渐增强并在给药后24小时达到最大值。结论本研究成功制备出TFPNPs,该纳米粒对4T1细胞有较好的靶向效果,并具有较好的光声成像效果。