由禾谷丝核菌引起的小麦纹枯病是一种世界性小麦土传真菌病害，几乎遍布世界各温带小麦种植区。该病在我国小麦产区均有发生，为黄淮平原及长江流域麦区的主要病害之一。本研究根据禾谷丝核菌的β-微管蛋白基因(β-tublin)的DNA序列设计了一对禾谷丝核菌的特异性引物RtubF4和RtubR4，对该引物的特异性和灵敏性进行了测定，建立并优化了基于SYBR Green I荧光染料法的real-time PCR反应体系。结果表明:该对引物除对禾谷丝核菌能扩增出187bp大小的特异性条带外，对其他小麦茎基部病害病原菌均没有扩增产物，说明该引物具有较强的特异性，可以作为鉴定土壤中禾谷丝核菌的特异性引物。用该对引物对菌丝体DNA的10倍梯度稀释液进行Real-time PCR检测，可以检测到的DNA下限值为100fg。在此基础上制作了禾谷丝核菌基因组DNA的real-time PCR标准曲线:y=-3.395log(x)+21.53(R2=0.999),E=97％，其中Y表示Ct值，x表示DNA浓度，R2表示相关系数，E表示扩增效率。对人工接种的土壤中的禾谷丝核菌进行定量检测，可以检测到的下限值为10cfu或者4.36pg DNA。本研究建立的基于SYBR Green Ⅰ的real-time PCR检测体系可以准确地鉴定和定量检测土壤中禾谷丝核菌，这将有助于对田间病害的发生情况进行早期诊断和动态监测，为小麦纹枯病的防治提供理论依据。