【摘 要】
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本试验用RT-PCR方法从ConA刺激的四川山地乌骨鸡的外周血淋巴细胞和脾淋巴细胞总RNA分别扩增了鸡IL-2和IL-15的cDNA.将分离的cDNA片段克隆到PMD18-T载体,进行序列测定分析.结果表明:鸡IL-2基因全部的开放阅读框432bp,与Genbank数据库中的序列进行同源性比较发现:山地乌骨鸡IL-2基因与其他品种鸡IL-2基因核苷酸同源性为98.4％～99.5％.鸡IFN-γ基因
【机 构】
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四川农业大学动科院动物预防医学生物工程实验室,四川雅安,625014 四川农业大学动科院动物预防医
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本试验用RT-PCR方法从ConA刺激的四川山地乌骨鸡的外周血淋巴细胞和脾淋巴细胞总RNA分别扩增了鸡IL-2和IL-15的cDNA.将分离的cDNA片段克隆到PMD18-T载体,进行序列测定分析.结果表明:鸡IL-2基因全部的开放阅读框432bp,与Genbank数据库中的序列进行同源性比较发现:山地乌骨鸡IL-2基因与其他品种鸡IL-2基因核苷酸同源性为98.4％～99.5％.鸡IFN-γ基因全部的开放阅读框495bp,与GenBank上报道的核苷酸序列同源性为97.4％～100％.鸡IL-15基因基因全部的开放阅读框564bp,与GenBank上序列比较发现,山地乌骨鸡IL-15与其他序列同源性为98.9％～99.8％.目前很少关于鸡IL-15的研究报道及其疫苗佐剂效应的报道.本研究结果发现:从免疫后5 d开始,加佐剂组抗体水平、CD4+和CD8+百份含量一直高于DNA疫苗组.免疫后21 d,pDNAIL15/DNA疫苗组,与DNA疫苗组抗体水平出现差异显著.其他各时期差异不显著.免疫后5～21 d,加佐剂组CD4+百分含量显著高于DNA疫苗组(P＜0.05),免疫后15d时,均出现差异极显著(P＜0.01).pDNAIL15/DNA疫苗组与pDNAIL2/DNA疫苗组和DNA疫苗组在免疫后29 d出现差异极显著(P＜0.01).所有加佐剂组CD8+T淋巴细胞数量,在免疫后29 d均极显著高于DNA疫苗免疫组(P＜0.01).且免疫后15～39 d,pDNAIL15/DNA疫苗CD8+T淋巴细胞百分含量显著高于pDNAIL2组/DNA疫苗和DNA疫苗组(P＜0.05).HI抗体水平在免疫后10、15、21 dpDNAIL-15/AI灭活苗与AI灭活苗单独免疫差异显著(P＜0.05),免疫后10、21d pDNAIL-2/AI灭活苗与AI灭活苗单独免疫差异显著(P＜0.05).免疫第10 d时,pDNAIL-15/灭活苗组和pDNAIL-2/ AI灭活苗HI效价分别为5.5log2和5.3log2,免疫后10 d后,pDNAIL-15/AI灭活苗组CD4+淋巴细胞百分含量显著高于pDNAIL-2/AI灭活苗和AI灭活苗单独免疫组(P＜0.05).免疫后23 d,pDNAIL-2/AI灭活苗组CD4+淋巴细胞百分含量显著高于pDNAIL-15/AI灭活苗和AI灭活苗单独免疫组(P＜0.05).由此,可以看出pDNAIL-2和pDNAIL-15具有提高禽流感灭活疫苗效果的作用.
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