【摘 要】
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目的：通过原代培养大鼠大脑皮层细胞,并进行不同氧浓度环境下不同时间的处理,检测不同条件下大脑皮层细胞上清中液脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白水平和细胞内BDNF mRNA水平变化.方法：分离新生24h内SD大鼠大脑皮层细胞,接种于预先0.01％多聚赖氨酸铺被的48孔板中,CO2孵箱中进行培养,培养基为添加2％ B27的Neurobasal.5天后为所有细胞更换培养基,然后将低氧组细胞转移至低氧工
【机 构】
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上海体育学院运动科学学院,上海200438
【出 处】
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2012年中国运动生理生化学术会议
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目的：通过原代培养大鼠大脑皮层细胞,并进行不同氧浓度环境下不同时间的处理,检测不同条件下大脑皮层细胞上清中液脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白水平和细胞内BDNF mRNA水平变化.方法：分离新生24h内SD大鼠大脑皮层细胞,接种于预先0.01％多聚赖氨酸铺被的48孔板中,CO2孵箱中进行培养,培养基为添加2％ B27的Neurobasal.5天后为所有细胞更换培养基,然后将低氧组细胞转移至低氧工作站,在1％和4％氧浓度环境下分别处理3h(H3)和6h(H6),其相应的常氧(20％)对照组细胞(C3和C6)则继续放置CO2孵箱中.低氧处理结束后,收集常氧和低氧条件下的细胞培养液,通过ELISA法(美国BioTeck公司Eonc型酶标仪、美国Ray Biotech,Inc公司大鼠BDNF试剂盒)检测细胞上清液中BDNF的蛋白含量,qRT-PCR法(美国Applied biosystems公司7500 Fast型QPCR仪,Invitrogen公司逆转录及SYBR Green Ⅰ PCR试剂盒)检测细胞内mRNA水平.每个实验独立重复三次.实验数据采用SPSS17.0统计学软件进行分析,4％或1％氧浓度内低氧组和常氧组之间比较采取单因变量多因素方差分析,4％和1％氧浓度之间结果的比较采取独立样本t检验,P ＜0.05定为有统计学差异.结果：1)4％氧浓度环境处理细胞3h和6h,细胞上清液中BDNF浓度分别为：C3： 9.72±1.15 pg/ml,H3：10.65±1.62 pg/ml,C6：9.81±1.26 pg/ml,H6：14.83±1.76 pg/ml；细胞内mRNA水平分别为C3：1、H3：1.1±0.18、C6：1、H6：7.19 ±0.29.6h组具有统计学差异(P＜0.05).2)1％氧浓度环境处理细胞3h和6h,细胞上清液BDNF浓度分别为：C3：9.89±1.01pg/ml,H3：10.90±0.95 pg/ml,C6：9.97±1.4 pg/ml,H6：20.02±2.66 pg/ml；细胞内mRNA水平分别为C3：1,H3：2.64 ±0.84,C6：1,H6：4.77±0.89.6h组具有统计学差异(P＜0.05).结论：4％和1％氧浓度环境处理皮层细胞3h对细胞表达BDNF无明显影响,但有增加的趋势,处理细胞6h时均能明显上调细胞分泌BDNF和表达BDNF mRNA,其中1％氧浓度环境上调细胞分泌BDNF的幅度大于4％氧浓度环境(P＜0.05),而上调细胞表达BDNF mRNA的幅度则小于4％氧浓度环境(P＜0.05).提示低氧可诱导大鼠大脑皮层细胞表达BDNF,且对低氧浓度和低氧刺激时间具有依赖性.
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