【摘 要】
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本文应用环介导等温扩增技术(1oop-mediated isothermal amplification,LAMP)对布鲁氏菌进行研究,针对布鲁氏菌保守基因16SrDNA设计LAMP引物。通过浊度法得到LAMP优化后的反
【机 构】
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大连工业大学; 辽宁出入境检验检疫局;
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本文应用环介导等温扩增技术(1oop-mediated isothermal amplification,LAMP)对布鲁氏菌进行研究,针对布鲁氏菌保守基因16SrDNA设计LAMP引物。通过浊度法得到LAMP优化后的反应条件是62℃恒温60min,内引物1.50μmol/μL、外引物0.20μmol/μL、环引物1.0μmol/μL。应用建立好的LAMP反应条件进行特异性及灵敏性试验。试验结果显示,该LAMP方法与3株布鲁氏菌均发生了扩增反应,达到阳性浊度值,而与小肠耶尔森(ATCC9510)、大肠杆菌(ATCC25922)、沙门氏菌(ATCCl0708)和金黄色葡萄球菌(ACTT33591)等标准菌株没有扩增反应,表明该方法具备较好的特异性,能够将布鲁氏菌与其他菌株区分开来。应用浊度法和实时荧光法对LAMP方法的灵敏度进行评价,两种方法的检测低限分别为为4.36fg/μL和436fg/μL,其灵敏度均高于普通PCR的最低检出值4.36pg/μL。与普通PCR相比,灵敏度大幅提高,具有明显的优势。LAMP检测技术用于布病临床诊断具有快速、高效、便捷等特点,为基层布病的病原学诊断具有潜在的实用价值。
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