水禽H5亚型流感病毒M基因的克隆与序列分析

来源 :中国畜牧兽医学会禽病学分会第12次学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:romotic
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本研究从安徽省、上海市和福建省共收集了六株H5亚型水禽AIV,分别为AHYG株、AHFD株、A29株、A30株、CH株和YM株,并对其M基因进行了克隆与序列分析及病毒对金刚烷胺敏感性的测定.结果表明:(1)M1基因的变异较大,主要集中在M1基因的C端.(2)六株病毒M基因的核苷酸序列与GenBank注册的所有M基因的核苷酸序列同源性均在96.5﹪~99.5﹪之间;六个毒株与GenBank注册的M1基因核苷酸序列的同源性在95.5﹪~99.3﹪之间;与GenBank注册的M2基因核苷酸序列的同源性在97.3﹪~99.7﹪之间.M1基因推导的氨基酸序列的同源性在95.3﹪~99.6﹪之间,M2基因94.9﹪~99﹪.(3)M1基因和M2基因中,A29、A30、AHYG株处于一个分支,M1基因中AHFD、YM和CH株处于另一分支;而M2基因中AHFD、YM、CH却分别处于不同的分支.(4)金刚烷胺对本研究的六个毒株均有作用,未发现耐药毒株.
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为从分子水平探究从我国南方几个省份饲养的水禽中分离的H5亚型禽流感病毒的变异和毒株的进化关系,本研究应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从7株鸭源分离株扩增出流感病毒株HA基因片段,构建重组质粒,最后对重组质粒进行了序列分析.分析发现,7株分离病毒间的核苷酸同源性为96.1﹪~99.7﹪,与GenBank上部分H5亚型禽流感病毒的核苷酸同源性则96.6﹪~99.0﹪.结果表明,所分离的七
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参考A型AIV M基因和HA基因序列,人工设计了两对引物.其中XZ145-2和XZ146为通用引物,可以检测所有A型AIV,扩增长度为244bp;XZ H9-1和XZ H9-5为H9亚型AIV特异性引物,扩增长度为488bp.通过对多重RT-PCR扩增条件的优化,成功建立了快速检测鉴别H9亚型AIV多重RT-PCR技术.特异性和敏感性试验结果表明,该多重RT-PCR对H9亚型AIV能够同时扩增出两
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