【摘 要】
：
本文基于融合PCR技术,以来自于Alkalimonas amylolytica 的α-淀粉酶碳水化合物结合区域(CBMAmy)与来自于Paenibacillus macerans 的环糊精糖基转移酶(CGTase)为基础构建
【机 构】
：
江南大学生物工程学院,工业生物技术教育部重点实验室,江苏无锡,214122
【出 处】
：
第七届中国工业生物技术发展高峰论坛
论文部分内容阅读
本文基于融合PCR技术,以来自于Alkalimonas amylolytica 的α-淀粉酶碳水化合物结合区域(CBMAmy)与来自于Paenibacillus macerans 的环糊精糖基转移酶(CGTase)为基础构建了两种嵌合酶,提高用可溶性淀粉为糖基供体合成2-O-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸(AA-2G)的效率.其中嵌合酶1是以CBMAmy替换CGTase的碳水化合物结合域(结构域E),定义为CGT△ECBMAmy；嵌合酶2是将CBMAmy直接融合于CGTase的C末端,定义为CGT-CBMAmy.两种嵌合酶均能够以廉价易溶的可溶性淀粉为糖基供体合成AA-2G.在最适酶反应条件下,嵌合酶CGT△ECBMAmy和CGTCBMAmy用可溶性淀粉为糖基供体合成AA-2G的产量分别为2.01和3.03g／L,分别比原始CGTase提高了3.94倍和5.94倍.然后通过对两种嵌合酶的反应动力学分析,进一步验证了它们对底物(可溶性淀粉)的结合能力有所提高.同时,相比于原始CGTase,两种嵌合酶具有较高的水解活力和歧化活力,这将有助于AA-2G的合成.最后,通过蛋白模拟及底物分子对接技术,进一步推测嵌合酶对可溶性淀粉特异性结合能力提高可能与碳水化合物结合位点的增加以及碳水化合物结合能力的提高有关.
其他文献
“室内”隐喻着光线暗,对数字摄像机(以下简称DV)来说就是“条件苛刻”,不过这却是广大用户最普遍的应用领域,因此DV的暗光线性能被推到了DV性能首屈一指的地位,以至于出现了
随着全球气候变化,二氧化碳温室气体的排放量不断增加以及化石燃料的逐渐枯竭等全球重大资源与环境问题的日趋突出,发展可再生生物能源已经引起了世界许多国家的普遍关注
[背景]耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin Resistant Staphylococcus aureus,MRSA)是一种具有多重耐药性的人畜共患病原菌,常引起奶牛乳房炎等疾病.形成生物被膜是MRSA重
[背景]肽聚糖(Peptidoglycan,PG)是细菌细胞壁的重要组成部分,而霍乱弧菌 分泌系统(Type Ⅵ Secretion System,T6SS)可以分泌具有肽聚糖水解酶活性的效应蛋白到受体细菌中杀
我国酶制剂行业利用工程菌生产工业酶的表达系统有：大肠杆菌表达系统,芽孢杆菌表达系统和毕赤酵母表达系统等。这些商业化的蛋白表达系统受到国外公司的严格专利保护和限
针对环境微生物中90％以上微生物不可培养等问题，采用未培养技术(包括元基因组技术、单细胞基因组技术)收集特定环境中微生物酶基因资源是未来工业酶制剂发展的一个趋势之一
静脉营养已成为今日临床不可缺少的治疗措施之一。已知增加葡萄糖的供给有利于氨基酸的利用。然而从外周静脉输注葡萄糖溶液,将受输液量与浓度的限制。脂肪在体内氧化,产生
[目的]为筛选安全、高效的耐热木霉功能菌株,有效促进热作区香蕉的生产,本研究从热作区土壤分离筛选适温范围较宽的木霉菌株,研制木霉生物有机肥,并研究其对香蕉枯萎病发病率
新型酶制剂开发的二个关键因素是新基因筛选和蛋白质高效,二者缺一不可。我们首先通过筛选已知序列和葡萄穗霉基因组测序,从12株真菌中筛选出26个淀粉酶,其中15个真菌淀
为摸清广州地区生产和食用的粮油、牛奶、水果等食品有机氯农药(六六六、DDT)的残留情况,我们在1977年底～1978年选择市、郊、县有代表性的产区(公社、生产队、农场、牛场、销