【摘 要】
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本研究采用显微注射法制备bcr启动子启动报告基因egfp表达的转基因小鼠,在活体水平验证bcr启动子的启动特异性.首先,以慢性髓性细胞白血病细胞株K562细胞基因组为模板,PCR扩
【机 构】
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蚌埠医学院实验动物中心,安徽蚌埠233030扬州大学比较医学中心,江苏扬州225009扬州大学医学院,江苏扬州225001
【出 处】
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华东地区第13届实验动物科学学术交流会
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本研究采用显微注射法制备bcr启动子启动报告基因egfp表达的转基因小鼠,在活体水平验证bcr启动子的启动特异性.首先,以慢性髓性细胞白血病细胞株K562细胞基因组为模板,PCR扩增了1.1kb bcr启动子,在扩增产物的上、下游引物加入了EcoR Ⅰ酶切位点.Ase Ⅰ、EcoR Ⅰ双酶切pEGFP-N1真核表达质粒载体,去除载体自身的CMV启动子,将1.1 kb bcr启动子定向克隆到EGFP绿色荧光蛋白报告基因上游,构建了pbcr-EGFP真核表达载体;重组质粒瞬时转染K562细胞和NIH3T3细胞,进行真和表达验证后,酶切回收获得目标片段,显微注射583枚受精卵,移植到30只受体鼠输卵管中,受体鼠怀孕26只,共生产首建鼠90只,经过PCR检测,4＃(♀)、36＃(♂)和81＃(♂)等3只F0代为转基因整合阳性鼠.
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