【摘 要】
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目的：真核表达arresten蛋白，并研究其对体外培养大鼠血管平滑肌细胞生物学行为的影响。方法：脂质体介导，将含有人arresten基因的重组质粒pSecTag2-AT转染COS-7细胞;应用RT-PCR检测转染细胞目的基因mRNA表达;收集转染48h上清液，浓缩后Westemblot分析检测目的蛋白的表达。用转染细胞上清液处理平滑肌细胞后，采用CCK-8法检测arresten蛋白对细胞增殖的影响
【机 构】
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华中科技大学同济医学院协和医院普外科,武汉 430022
【出 处】
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第三届全国血管外科和组织工程学术会议暨第二届全国下肢血管疾病论坛
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目的：真核表达arresten蛋白，并研究其对体外培养大鼠血管平滑肌细胞生物学行为的影响。
方法：脂质体介导，将含有人arresten基因的重组质粒pSecTag2-AT转染COS-7细胞;应用RT-PCR检测转染细胞目的基因mRNA表达;收集转染48h上清液，浓缩后Westemblot分析检测目的蛋白的表达。用转染细胞上清液处理平滑肌细胞后，采用CCK-8法检测arresten蛋白对细胞增殖的影响;采用Transwell趋化小室法进行细胞迁移实验;采用Annexin V/FITC法检测arresten蛋白对平滑肌细胞体外凋亡的影响。
结果：RT-PCR结果显示转染arresten基因的COS-7细胞基因组中存在有目的基因特异性片段(449bp)，表明基因转染成功;Western blot结果表明转染细胞上清液中有目的蛋白表达。细胞体外增殖分析显示arresten蛋白可显著抑制血管平滑肌细胞的体外增殖(F=40.154，P<0.01)，呈时间和剂量依赖性;Transwell小室法检测显示经对照细胞，空载体转染及重组质粒转染的COS-7细胞培养上清液处理的平滑肌细胞迁移数为(28.70±3.97)个、(26.10±4.53)个、(14.00±3.33)个，差异具有显著统计学意义(F=38.915，P<0.01)：凋亡分析表明arresten蛋白对平滑肌细胞的凋亡具有促进作用(F=29.32，P<0.01)，不同作用时间的凋亡率无统计学差异(P>0.05)。
结论：真核表达的人arresten蛋白能有效抑制血管平滑肌细胞的增殖和迁移，并能显著促进平滑肌细胞的凋亡，为后续体内动物实验奠定了基础。
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