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目的 本实验以体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞为载体,研究BSHX含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞ActA /Smads信号传导通路的影响,并确定其相关作用靶点,阐明其促进卵泡发育的微观机制,从而为补肾中药的新药研宄奠定实验研宄基础.方法 1.采用简单机械分离方法建立SD大鼠卵巢颗粒细胞体外培养体系,光镜下观察细胞生长情况,采用FSHR免疫组化及HE染色法进行细胞鉴定；2.随机分成8组,每组设12个复孔,即1％、5％、10％、15％、20％不同浓度含药血清培养液组(含药血清取中剂量组),FSH 25ng/ml,15％胎牛血清培养液组,无血清培养液组,100ul/孔,48h后检测OD值,确定最适浓度,另收集上清液测定不同浓度下48h后E2、P分泌量；3.随机分成6组,即：15％BSHX含药血清高、中、低剂量组、15％生理盐水含药血清组、25ng/mlFSH组含药血清以及无血清DMEN/F12培养液空白组,分别于1h、2h、6h、12h、24h、48h后ELISA法测定ActA分泌量及免疫组化SP法测定ActR Ⅱ A、Smad2、Smad3表达量.结果 1.体外培养的卵巢颗粒细胞生长良好,12h后长出伪足,3-4d进入增生期,14d左右细胞凋亡明显,FSHR免疫组化阳性染色：核呈蓝紫色,浆呈棕黄色,且阳性率大于95％,HE染色：核呈深蓝色,胞浆呈淡红色；2.BSHX含药血清最适浓度为15％,各组差异有统计学意义,p＜0.05；48h后15％BSHX含药血清E2、分泌量最为明显,各组差异有统计学意义,p＜0.05；p分泌变化无统计学意义,p＞0.05；3.各BSHX含药血清组ActA分泌量与时间存在一定的依赖性,12h后出现峰值,最佳剂量为中剂量组；各BSHX含药血清组中ActRⅡA、Smad2、Smad3免疫染色主要位于细胞核,且均与时间存在一定的依赖性,12h后出现峰值.结论 BSHX含药血清能促进体外培养的卵巢颗粒细胞增殖和分化,促进其E2、P的分泌.通过促进ActA的分泌量和上调ActR Ⅱ A、Smad2、Smad3表达来影响ActA/Smads信号通路的传导.