【摘 要】
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目的:以聚乙烯亚胺多聚阳离子纳米载体(polyethylenimine,PEI)作为端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleo
【机 构】
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郑州大学药学院,河南郑州 450001
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目的:以聚乙烯亚胺多聚阳离子纳米载体(polyethylenimine,PEI)作为端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)载体转染A549细胞,研究其对A549细胞的影响.
方法:采用MTT法检测PEI/ASODN纳米复合物对细胞的增殖作用情况;激光共聚焦显微镜检测5-FITC标记的ASODN(FASODN)转染细胞后PEI/FASODN纳米复合物的摄入情况胞摄入情况;RT-PCR法检测转染后hTERT mRNA的表达;免疫细胞化学技术检测端粒酶hTERT蛋白的表达;流式细胞术Annexin-v-FITC和PI双标法检测细胞凋亡情况.
结果:40 μg/ml的PEI/ASODN纳米复合物转染细胞后产生良好的生长抑制作用;5-FITC标记的ASODN(FASODN)转染细胞后,PEI/FASODN组细胞内有大量荧光物质,而单纯FASODN组细胞内无明显荧光;RT-PCR检测结果表明PEI/ASODN纳米复合物作用于A549细胞72h时,hTERT mRNA水平明显降低,与CELL组相比有显著差异(P＞0.05);细胞hTERT蛋白的表达也显著降低,与RT-PCR结果具有一致性;转染72h后PEI/ASODN组出现明显早期凋亡和晚期凋亡,凋亡率分别为36.53％和54.28％.
结论:PEI介导的hTERT ASODN能有效抑制A549细胞增殖,使hTERT mRNA水平明显降低从而抑制hTERT蛋白的表达,使细胞产生凋亡,对该细胞生长有明显抑制作用.
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