研究背景:gamma delta (γδ)T细胞治疗在肿瘤综合治疗中的重要作用逐渐显现。因此,综合评价γδT细胞治疗与其它治疗手段相结合能否发挥更好的临床治疗效果,对肿瘤的治疗有重要指导意义。DNA甲基化特异性抑制剂地西他滨(Decitabine,DAC)能够抑制肿瘤细胞增殖以及防止耐药的发生,用于治疗骨髓增生异常综合症。进一步研究发现DAC能够提高肿瘤细胞的免疫原性,从而使肿瘤细胞更易于被免疫细胞识别和杀伤。但是DAC对免疫细胞,尤其是对γδT细胞功能的影响鲜有报道。研究目的 :观察DAC对γδT细胞活性、增殖、周期、因子分泌和细胞毒性的影响,并阐明其作用机制,从而为临床上联合DAC和γδT细胞治疗肿瘤提供理论基础。研究方法 :γδT细胞经DAC处理48 h后,采用流式细胞术检测γδT细胞活性、细胞增殖、细胞周期以及细胞表面抑制性受体和活化性受体的表达。采用Calcein-AM释放实验检测γδT细胞经DAC处理前后的抗肿瘤作用变化。采用抗体阻断实验分析DAC对γδT细胞抗肿瘤作用的影响与γδT细胞表面活化性和抑制性受体表达之间的关系。最后,通过qPCR,Western Blot和Chip实验分析DAC对γδT细胞抗肿瘤作用影响的机制。结果 :DAC能够诱导微弱的γδT细胞凋亡,抑制γδT细胞的增殖和对肿瘤细胞的杀伤作用,但对γδT细胞的周期无影响。DAC通过提高γδT细胞表面KIR2DL2/3的表达,降低γδT细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。KIR2DL2/3启动子区域甲基化程度比较高,DAC可以使之去甲基化;NKG2D的启动子区域甲基化程度比较低,DAC对该区域无明显去甲基化作用。DAC可以通过提高转录因子Sp-1在KIR2DL2/3基因启动子区域的富集程度,促进KIR2DL2/3基因的转录和蛋白的表达。结论 :临床上使用DAC治疗时,考量DAC对体内γδT细胞的抑制作用,使用过继γδT细胞输注有可能够改善DAC对机体内γδT细胞抗肿瘤作用的影响,进一步提高临床治疗效果。