【摘 要】
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具有显著的临床疗效的治疗血管性痴呆的清脑益智方表现出了其对缺氧复氧神经元的保护作用.本实验用水煎醇沉的方法将清脑益智方制成清脑益智方浸膏,然后给大耳白家兔连续灌饲3天清脑益智方浸膏,在最后一次灌服清脑益智方浸膏后1.5h,通过耳缘静脉空气注射将大耳白家兔处死,然后抽取其脑脊液,经离心过滤除菌后-20℃保存备用.并采用同法制备阳性对照药物丁基苯酞(恩必普)含药脑脊液.原代培养皮层神经元,将神经元细胞
【机 构】
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广州中医药大学附属深圳市中医院 天津中医药大学
【出 处】
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2015年广东省中医药学会脑病专业委员会学术年会
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具有显著的临床疗效的治疗血管性痴呆的清脑益智方表现出了其对缺氧复氧神经元的保护作用.本实验用水煎醇沉的方法将清脑益智方制成清脑益智方浸膏,然后给大耳白家兔连续灌饲3天清脑益智方浸膏,在最后一次灌服清脑益智方浸膏后1.5h,通过耳缘静脉空气注射将大耳白家兔处死,然后抽取其脑脊液,经离心过滤除菌后-20℃保存备用.并采用同法制备阳性对照药物丁基苯酞(恩必普)含药脑脊液.原代培养皮层神经元,将神经元细胞按照1×106的浓度接种于96孔细胞培养板,将细胞分为正常组、缺氧复氧组、正常脑脊液组、清脑益智方含药脑脊液高剂量组、清脑益智方含药脑脊液低剂量组、恩必普组(除正常细胞组外,其余各组均在添加相应干预措施后进行缺氧24h复氧24h处理).用倒置显微镜观察细胞形态变化;采用CCK-8试剂盒检测细胞活力;并采用日立全自动生化分析仪检测培养细胞上清液中LDH的浓度.采用Tunnel法检测细胞的凋亡情况;采用Elisa法检测细胞上清液中SYN、MAP-2、GAP-43等突触重塑标志物的表达.采用Western blot法检测磷酸化PI3K及磷酸化Akt的表达.采用RT-PCR法检测PI3K、Akt、mTOR基因表达.研究结果表明清脑益智方具有抗缺氧复氧致皮层神经元损伤、提高细胞活力的作用.清脑益智方能够抗缺氧复氧引起的皮层神经元的凋亡.清脑益智方具有促进缺氧复氧损伤皮层神经元突触重塑的作用.请脑益智方可促进缺氧复氧损伤皮层神经元p-PI3K、p-Akt蛋白表达,并能够上调PI3K、Akt、mTOR mRNA表达.
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