【摘 要】
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目的:利用大肠杆菌原核表达系统表达并纯化肠道病毒71型(EV71)VP1蛋白,并对重组蛋白功能进行初步鉴定。方法：PCR扩增EV71 VP1全长基因,在测序正确的基础上将其插入表达载体pEI30a(+),构建表达质粒pET30a(+)/VP1,转化表达菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,利用Ni2+素和层析柱对重组蛋白进行纯化,经ELISA和Western Blot验证EV71 VP1的抗原性
【机 构】
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南京医科大学公共卫生学院,南京210009 南京农业大学兽医学院,南京210095
【出 处】
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江西省科协第二届学术年会暨华东地区第十一次流行病学学术交流会议
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目的:利用大肠杆菌原核表达系统表达并纯化肠道病毒71型(EV71)VP1蛋白,并对重组蛋白功能进行初步鉴定。方法：PCR扩增EV71 VP1全长基因,在测序正确的基础上将其插入表达载体pEI30a(+),构建表达质粒pET30a(+)/VP1,转化表达菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,利用Ni2+素和层析柱对重组蛋白进行纯化,经ELISA和Western Blot验证EV71 VP1的抗原性。结果：成功构建pET30a(+)/VP1重组质粒,经大肠杆菌表达、纯化获得分子量约为38kDa的融合蛋白,经ELISA和Western Blot结果显示该蛋白有良好的抗原性。结论：实现了肠道病毒71型VP1蛋白的原核高效表达,为肠道病毒71型诊断试剂和疫苗的研究奠定了基础。
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