重亚硫酸盐测序确定多胸椎蒙古羊hoxc8 exon-1 CpG岛甲基化位置与密度

来源 :第十五次全国动物遗传育种学术讨论会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:changewu1
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蒙古羊中多脊椎个体的胸椎和腰椎变异具有基因组印记(Genomic Imprinting)遗传特征,CpG岛中胞嘧啶的甲基化是印记所必需的。亚硫酸盐基因组测序(Bisulfate Sequencing) PCR专一地检测甲基化胞嘧啶,可以直接确定基因组DNA甲基化位点。因为亚硫酸氢盐处理后链不再互补,因此可以扩增并单独测序,亚硫酸氢盐处理的DNA PCR扩增产物可以直接测序检测甲基化平均水平,或克隆测序确定甲基化发生的位置。胞嗜咤残基与亚硫酸氢钠的反应导致选择性转化为尿嘧啶。只有非碱基配对胞嘧啶可以被亚硫酸氢钠有效的修饰,例如单链DNA。在特定条件下,反应具有高度选择性,非甲基化胞嘧啶残基完全反应,而5-甲基胞嘧啶则完全不转化。
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