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柱型苹果拥有直立主干,节间短小侧枝少,方便修剪,适合于盆栽景观或高度密植栽培模式,便于机械化栽培。柱型苹果由单显性基因Co控制,Co位于苹果的第10号染色体。目前通过精细定位和转基因等手段,发现MdCoL是控制苹果柱型性状形成的主要基因,但MdCoL基因对柱型苹果的调控机理鲜有研究。因此,筛选MdCoL互作蛋白对于阐释株型形成的分子机理有重要意义。利用酵母双杂交方法筛选出与柱型MdCoL互作的蛋白,进而对其调控机理进行研究。以柱型苹果威赛克和普通型苹果旭春、夏和秋季新梢以及茎、叶、芽、花和果实为材料。以pGADT7质粒为载体,将柱型苹果MdCoL克隆于pGBKT7载体中,构建酵母双杂交cDNA文库。在SD营养缺陷培养基上进行载体的自激活和毒性检测。将在SD-Leu-Trp缺陷培养基上得到的阳性克隆转至SD-Leu-Trp-His-Ade上,经过和对照菌株的显色强弱比对,挑选与MdCoL互作的蛋白进行测序分析。利用双分子荧光互补(BiFC)实验分别构建N端和C端载体并转化农杆菌,混合同时注射烟草,激光共聚焦显微镜观察荧光效果。克隆得到苹果柱型基因MdCoL的开放阅读框,并将其连接到酵母双杂交诱饵载体pGBKT7中,得到pGBKT7-MdCoL重组质粒。将pGBKT7和pGBKT7-MdCoL分别转化至酵母菌株Y2HGold中,于SD营养缺陷培养基上进行pGBKT7-MdCoL的自激活和毒性检测。以柱型苹果的根、茎、叶、芽、花和果实为材料,通过SMART技术合成双链cDNA并获得文库。利用质粒的共转化方法将构建好的pGBKT7-MdCoL钓饵表达载体质粒共同转化到酵母菌Y2HGold中,将转化好的pGBKT7-MdCoL钓饵表达载体质粒的菌液涂布在SD-Leu-Trp缺陷型培养基平板上,筛选获得含有钓饵载体的克隆,共获得142个与MdCoL蛋白互作的候选克隆。经过测序获得36个读码框较完整的cDNA序列,最后将获得的序列进行数据库捜索、比对,对可能互作的相关蛋白编码基因进行了注释分析。最后通过qRT-PCR、酵母双杂交和双分子荧光互补(BiFc)技术,确定了MdCoL可以与MdDREB2发生互作。