【摘 要】
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表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)是一种促进细胞增殖、分化的活性因子,不仅参与调节各种生理功能,而且在医疗保健中应用广泛,本实验希望通过原核表达,获得有生物活性的犬EGF.设计4条引物,用SOE-PCR合成犬EGF (cEGF)基因,将cEGF基因克隆至表达载体pET-24a进行原核表达,对表达得到的重组蛋白纯化,MTT法测定重组蛋白的生物活性.SOE-PCR合
【机 构】
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河北工程大学农学院,邯郸056021 中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241
【出 处】
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上海市畜牧兽医学会2013年学术年会
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表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)是一种促进细胞增殖、分化的活性因子,不仅参与调节各种生理功能,而且在医疗保健中应用广泛,本实验希望通过原核表达,获得有生物活性的犬EGF.设计4条引物,用SOE-PCR合成犬EGF (cEGF)基因,将cEGF基因克隆至表达载体pET-24a进行原核表达,对表达得到的重组蛋白纯化,MTT法测定重组蛋白的生物活性.SOE-PCR合成得到cEGF基因,大小为156bp,编码52个氨基酸.构建融合表达质粒,转化至E.coli BL21,IPTG诱导表达,大部分表达为包涵体,通过变性、纯化、复性的过程后,每1L菌液得到重组犬EGF (rcEGF)为16.1mg,MTT法实验表明rcEGF具有生物活性.结果表明,原核表达、纯化的rcEGF具有生物活性.
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