基于DNA自组装亲和光交联分析组蛋白修饰介导复合物

来源 :第21届全国色谱学术报告会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hunanlyq
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构建了二元探针系统,首先通过探针1上的蛋白修饰亲和识别结合蛋白,然后利用探针1特有的DNA序列,将探针2通过DNA自组装靶向引导至结合蛋白,再引发光交联将结合蛋白键合到带有富集或检测标签的探针2,进而实现了较弱的蛋白分子间作用转化为稳定的共价键,并保持了修饰与结合蛋白的专一性识别,从而实现低丰度、弱作用蛋白复合物的高灵敏富集和分析。以组蛋白H3K4me3与其特定蛋白结构域PHD为例,在优化探针骨架、交联反应和分析方法的基础上,建立了的高选择性、高灵敏的检测方法。在此基础上,将探针富集与蛋白质组学技术相结合,在实际体系中鉴定到包括BPTF在内的很多己知的结合蛋白,同时还发现了多个未见报道但具有识别结构域的结合蛋白。这一工作为“修饰介导的蛋白-蛋白弱作用”鉴定提供了新的分析策略,结果表明:这一方法不仅可以高灵敏表征组蛋白修饰与结合蛋白的相互作用,也可用来筛选发现组蛋白修饰新的结合蛋白,因此在生物医学领域具有潜在的应用前景。
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