【摘 要】
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将环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)与横向流动试纸条技术(Lateral flow dipstick,LFD)联合应用,建立了一种快速、便捷的布鲁氏杆菌检
【机 构】
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天津市动物疫病预防控制中心,天津300402
【出 处】
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第五届京津冀畜牧兽医科技创新研讨会暨北京畜牧兽医学会“瑞普杯”新思想、新观点、新方法演讲会
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将环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)与横向流动试纸条技术(Lateral flow dipstick,LFD)联合应用,建立了一种快速、便捷的布鲁氏杆菌检测方法.针对布鲁氏杆菌OMP25 基因设计4 条特异性引物和1 条异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocyanate,FITC)标记的探针.生物素标记LAMP 扩增产物能够特异性地与FITC 标记的探针杂交,杂交产物经LFD 检测.优化后的扩增温度和时间为63 ℃反应50min,加上样品的前处理,完成检测仅需80min.LAMP-LFD 方法可特异性地检出布鲁氏杆菌,其最低检测限为5.4×100 CFU/mL,是利用外引物建立的PCR 方法的100 倍.试验结果表明,本研究建立的LAMP-LFD 方法能够快速、特异地检测布鲁氏杆菌；简单经济,不需要其他辅助仪器,结果即可直观判断；适合基层实验室、应急检测或现场监测等使用,具有较高的推广价值.
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