利用自制免疫亲和层析柱纯化抗Ara h 2抗体

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目的 :近年来,抗体已经被广泛应用于体内/外的科学研究中,不仅应用于细胞内/外蛋白的识别与定位,在以抗原抗体特异性反应作为理论基础的免疫亲和分离或检测分析中,高效价的抗体更是一种不可或缺的重要工具。本研究利用自制免疫亲和层析柱(Immunoaffinity Chromatography Columns,IAC)纯化抗Ara h 2的多克隆抗体。方法 :首先利用离子交换层析柱从花生中纯化得到Ara h 2蛋白,以此作为抗原,采用多点皮下注射的方式免疫日本大耳兔,获得高效价血清备用。然后利用纯化的Ara h 2制备免疫亲和层析柱,并对多克隆抗体进行纯化,并与商业购买的已被成功用于纯化多克隆抗体的抗体亲和免疫球蛋白G琼脂糖高速流动树脂(Mab Affinity Protein G Agarose High Flow Resin,MPG)进行比较。结果 :尽管自制免疫亲和层析柱的柱容量只有商购MPG柱的40%左右,但在纯化效率上,自制柱的纯化因子为126.6,高于MPG的77.3。结论 :实验数据表明,与商购MPG柱相比,自制免疫亲和层析柱纯化出来的目标抗体效价较高。此外,与商购MPG柱相比,自制柱的制备成本低廉,可广泛适用于实验室抗体纯化工作。
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