DNA甲基化水平及甲基化转移酶活性的电化学分析方法研究

来源 :第十二届全国电分析化学学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:gengjie_1986
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DNA甲基化是指在DNA甲基转移酶(MTase)的作用下,以S-腺苷甲硫氨酸(SAM)为甲基供体,将甲基转移到DNA链中特定碱基上的过程.大量研究表明,非正常DNA甲基化如果在细胞分裂过程中不被纠正,就会诱发遗传病或癌症。因此,研究甲基化形成与改变机制,建立准确性好、灵敏度高、操作简单的DNA甲基化分析方法,不仅可为某些肿瘤的早期诊断提供线索,还有助于治疗甲基化相关肿瘤新药物的发现及筛选。本文报道一种电化学分析方法用于分析DNA甲基化水平及DNA甲基转移酶活性,该方法通过分析标记在探针DNA分子(S1)上的电化学探针分子(羧基二茂铁,FcA)的电化学信号而检测DNA的甲基化水平及DNA甲基转移酶活性。以FcA作为电化学探针分子,将其通过酰胺键与固定在电极表面的探针DNA连接;以抑癌基因p53为研究对象,该基因中含HpaⅡ限制性内切酶的作用位点(5-C/CGG-3),该内切酶能剪切未甲基化的双链DNA,剪切后,固定在DNA上的FcA分子则脱离电极,导致电化学响应电流减小;甲基化的DNA则不能被剪切,电化学信号不变化,因此通过比较HpaⅡ限制性内切酶剪切前后FcA的电化学响应电流就能判断DNA的甲基化程度。由于FcA的氧化电位接近0V(vs.SCE),因而可以避免其他氧化物质的千扰;该方法还能用于分析甲基化酶的活性以及筛选一些抗癌药物。
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