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研究目的:探讨线粒体通透性转变孔(MPTP)对柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)宿主细胞凋亡的作用,为进一步研究鸡球虫病损伤机制提供理论依据.
研究方法:取鸡胚盲肠进行上皮细胞培养并对球虫子孢子进行扩繁,然后将体外培养的贴壁率达到90%以上的鸡胚盲肠上皮细胞(6孔板)分为3组,分别为空白对照组(C组),非处理组(T0组)和处理组(T1组).C组为不接种且不加药组;T0组为接种子孢子不加药组;T1组为接种子孢子且添加环孢菌素A(Ciclosporin A,CsA)组.于接种子孢子后4h、24h、48h、72h、96h、120h取样,每组设5个重复,采用Annexin V-FITC/PI荧光标记流式细胞技术分别测定C组、T0组以及T1组宿主细胞的早期凋亡率以及晚期凋亡和坏死率.
研究结果:与对照组比较,在接种E.tenella子孢子后4h,非处理组细胞的早期凋亡率、晚期凋亡和坏死率均显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)降低,24h至120h时,非处理组细胞的早期凋亡率、晚期凋亡和坏死率均显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)升高,均说明处于发育前期的E.tenella抑制了宿主细胞的凋亡,以有利于其在细胞内发育,在发育中后期,明显促进了细胞凋亡以有利于E.tenella扩散;与非处理组比较,在接种子孢子后24h~120h,处理组细胞的早期凋亡率、晚期凋亡和坏死率均显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)降低,说明CsA,作为一种特异的MPTP开放性抑制剂,可明显降低宿主细胞的凋亡率,进一步表明抑制MPTP的开放可明显降低宿主细胞的凋亡率。
研究结论:MPTP开放度下降导致宿主细胞的凋亡率明显降低。表明MPTP在调节E.tenella宿主细胞线粒体凋亡通路中起着至关重要的作用。